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Icityman

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[交流] 關(guān)于PCR拖尾現(xiàn)象

PCR跑出來(lái)是這個(gè)現(xiàn)象，體系優(yōu)化了不少次，梯度降落都做過(guò)了，還是這樣，求高手幫忙解決，謝謝�。�！

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1樓 2011-12-22 16:37:46

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harben

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引物設(shè)計(jì)有問(wèn)題，換引物是最好最快的選擇

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2樓2011-12-22 16:41:21

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Icityman

鐵蟲(chóng) (小有名氣)

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2樓: Originally posted by harben at 2011-12-22 16:41:21:
引物設(shè)計(jì)有問(wèn)題，換引物是最好最快的選擇

可是有拖尾不就是有克隆嗎？

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3樓2011-12-22 18:04:24

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jinpeng_6118

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西瓜(金幣+3): 鼓勵(lì)交流 2011-12-23 23:44:29

你這不是叫拖尾，根本就沒(méi)有你的目的條帶，不知道你是以什么為模版p的，如果是菌液的話就提取質(zhì)粒為模版再試試，如果是質(zhì)�；駾NA的話嘗試著稀釋100倍-1000倍再P下試試，前提是確認(rèn)你的引物沒(méi)問(wèn)題，要不就是克隆里沒(méi)的你目的片段

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4樓2011-12-22 19:19:35

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zhengli123

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這也太嚴(yán)重了吧，怎么會(huì)在那么大的位置拖帶呢，你的模板有問(wèn)題

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6樓2011-12-22 20:30:17

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qzhaiyan

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這哪叫拖尾啊，壓根沒(méi)有P出來(lái)啊。

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7樓2011-12-22 20:45:29

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yingying1588

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重做吧。

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5樓2011-12-22 20:22:43

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不是拖尾

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8樓2011-12-22 20:55:12

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模板有問(wèn)題

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9樓2011-12-22 20:55:37

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neon_alone

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我也曾經(jīng)出現(xiàn)過(guò)這樣的問(wèn)題，就是模板降解了，是CDNA P 的嗎？

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10樓2011-12-23 08:50:15

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wwb95599

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感覺(jué)沒(méi)有P出來(lái)，不是體系的問(wèn)題，應(yīng)該是引物和模板的問(wèn)題。建議樓主確認(rèn)下引物是否有問(wèn)題！

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11樓2011-12-23 10:36:18

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diaoruiying

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模板降解；從新提取模板DNA

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12樓2011-12-23 12:26:12

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ellar

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西瓜(金幣+4): Good! 2011-12-23 23:45:01

pcr失敗了，這非smear。建議陽(yáng)性對(duì)照檢驗(yàn)?zāi)０�；檢查引物特異性；三，分析目的基因GC含量，二級(jí)結(jié)構(gòu)等，考慮用LA taq或KOD酶，或者體系加適量甘油或DMSO

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13樓2011-12-23 22:12:40

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樓上正解

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14樓2011-12-23 22:16:42

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4樓: Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-12-22 19:19:35:
你這不是叫拖尾，根本就沒(méi)有你的目的條帶，不知道你是以什么為模版p的，如果是菌液的話就提取質(zhì)粒為模版再試試，如果是質(zhì)粒或DNA的話嘗試著稀釋100倍-1000倍再P下試試，前提是確認(rèn)你的引物沒(méi)問(wèn)題，要不就是克隆里 ...

我用的都是師兄師姐留下來(lái)的DNA，濃度應(yīng)該還好，我上次也檢測(cè)了一下，沒(méi)有降解

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15樓2011-12-24 09:53:31

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10樓: Originally posted by neon_alone at 2011-12-23 08:50:15:
我也曾經(jīng)出現(xiàn)過(guò)這樣的問(wèn)題，就是模板降解了，是CDNA P 的嗎？

不是，是DNA

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16樓2011-12-24 09:54:15

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13樓: Originally posted by ellar at 2011-12-23 22:12:40:
pcr失敗了，這非smear。建議陽(yáng)性對(duì)照檢驗(yàn)?zāi)０�；檢查引物特異性；三，分析目的基因GC含量，二級(jí)結(jié)構(gòu)等，考慮用LA taq或KOD酶，或者體系加適量甘油或DMSO

我想請(qǐng)問(wèn)一下，體系加甘油或DMSO起什么作用啊，而且加的量怎么控制呢

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17樓2011-12-24 09:55:58

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liukun261

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18樓2012-03-02 22:47:11

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fwks3518

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請(qǐng)寫(xiě)出你的擴(kuò)增條件，使用的模板情況等等，詳細(xì)點(diǎn)才好幫你分析

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19樓2012-03-03 09:19:22

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模板有問(wèn)題吧，跑下模板噻

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20樓2012-05-16 11:03:07

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elbo

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模板出問(wèn)題的可能性很大

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21樓2012-05-17 07:34:22

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lihongyue328

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親，這不是拖尾哦，沒(méi)有p出來(lái)目的條帶

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22樓2013-06-04 17:06:30

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沒(méi)想好名字

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這不是拖尾，因?yàn)閴焊蜎](méi)有主條帶。分析原因：1.模板分解了，且濃度過(guò)高2.引物的特異性太差3.退火溫度過(guò)低，可采用Tm-10x5+Tm-2x30試試，并逐漸改變退火溫度。

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23樓2015-05-08 11:21:58

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mataomatao

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24樓2015-05-09 09:50:27

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