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北京石油化工學院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告
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Icityman

鐵蟲 (小有名氣)


[交流] 關于PCR拖尾現(xiàn)象

PCR跑出來是這個現(xiàn)象,體系優(yōu)化了不少次,梯度降落都做過了,還是這樣,求高手幫忙解決,謝謝。!

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harben

銀蟲 (初入文壇)



Icityman(金幣+1):謝謝參與
引物設計有問題,換引物是最好最快的選擇
2樓2011-12-22 16:41:21
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Icityman

鐵蟲 (小有名氣)


引用回帖:
2樓: Originally posted by harben at 2011-12-22 16:41:21:
引物設計有問題,換引物是最好最快的選擇

可是有拖尾不就是有克隆嗎?
3樓2011-12-22 18:04:24
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jinpeng_6118

木蟲 (正式寫手)


★ ★ ★ ★
Icityman(金幣+1):謝謝參與
西瓜(金幣+3): 鼓勵交流 2011-12-23 23:44:29
你這不是叫拖尾,根本就沒有你的目的條帶,不知道你是以什么為模版p的,如果是菌液的話就提取質(zhì)粒為模版再試試,如果是質(zhì);駾NA的話嘗試著稀釋100倍-1000倍再P下試試,前提是確認你的引物沒問題,要不就是克隆里沒的你目的片段
4樓2011-12-22 19:19:35
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zhengli123

金蟲 (小有名氣)



Icityman(金幣+1):謝謝參與
這也太嚴重了吧,怎么會在那么大的位置拖帶呢,你的模板有問題
6樓2011-12-22 20:30:17
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qzhaiyan

木蟲 (著名寫手)



Icityman(金幣+1):謝謝參與
這哪叫拖尾啊,壓根沒有P出來啊。
7樓2011-12-22 20:45:29
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普通回帖

yingying1588

木蟲之王 (文學泰斗)



Icityman(金幣+1):謝謝參與
重做吧。
5樓2011-12-22 20:22:43
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leimiao_hit

木蟲之王 (文學泰斗)



Icityman(金幣+1):謝謝參與
不是拖尾
8樓2011-12-22 20:55:12
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leimiao_hit

木蟲之王 (文學泰斗)



Icityman(金幣+1):謝謝參與
模板有問題
9樓2011-12-22 20:55:37
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neon_alone

木蟲 (小有名氣)



Icityman(金幣+1):謝謝參與
我也 曾經(jīng)出現(xiàn)過這樣的問題,就是模板降解了,是CDNA P 的嗎?
10樓2011-12-23 08:50:15
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wwb95599

銅蟲 (小有名氣)



Icityman(金幣+1):謝謝參與
感覺沒有P出來,不是體系的問題,應該是引物和模板的問題。建議樓主確認下引物是否有問題!
11樓2011-12-23 10:36:18
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diaoruiying

木蟲 (著名寫手)



Icityman(金幣+1):謝謝參與
模板降解;從新提取模板DNA
12樓2011-12-23 12:26:12
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ellar

銅蟲 (小有名氣)


★ ★ ★ ★ ★
Icityman(金幣+1):謝謝參與
西瓜(金幣+4): Good! 2011-12-23 23:45:01
pcr失敗了 ,這非smear。建議陽性對照檢驗模板;檢查引物特異性;三,分析目的基因GC含量,二級結(jié)構(gòu)等,考慮用LA taq或KOD酶,或者體系加適量甘油或DMSO
13樓2011-12-23 22:12:40
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256k

新蟲 (正式寫手)



Icityman(金幣+1):謝謝參與
樓上正解
14樓2011-12-23 22:16:42
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Icityman

鐵蟲 (小有名氣)


引用回帖:
4樓: Originally posted by jinpeng_6118 at 2011-12-22 19:19:35:
你這不是叫拖尾,根本就沒有你的目的條帶,不知道你是以什么為模版p的,如果是菌液的話就提取質(zhì)粒為模版再試試,如果是質(zhì);駾NA的話嘗試著稀釋100倍-1000倍再P下試試,前提是確認你的引物沒問題,要不就是克隆里 ...

我用的都是師兄師姐留下來的DNA,濃度應該還好,我上次也檢測了一下,沒有降解
15樓2011-12-24 09:53:31
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Icityman

鐵蟲 (小有名氣)


引用回帖:
10樓: Originally posted by neon_alone at 2011-12-23 08:50:15:
我也 曾經(jīng)出現(xiàn)過這樣的問題,就是模板降解了,是CDNA P 的嗎?

不是,是DNA
16樓2011-12-24 09:54:15
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Icityman

鐵蟲 (小有名氣)


引用回帖:
13樓: Originally posted by ellar at 2011-12-23 22:12:40:
pcr失敗了 ,這非smear。建議陽性對照檢驗模板;檢查引物特異性;三,分析目的基因GC含量,二級結(jié)構(gòu)等,考慮用LA taq或KOD酶,或者體系加適量甘油或DMSO

我想請問一下,體系加甘油或DMSO起什么作用啊,而且加的量怎么控制呢
17樓2011-12-24 09:55:58
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liukun261

禁蟲 (小有名氣)


Icityman(金幣+1):謝謝參與
本帖內(nèi)容被屏蔽

18樓2012-03-02 22:47:11
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fwks3518

木蟲 (正式寫手)



Icityman(金幣+1):謝謝參與
請寫出你的擴增條件,使用的模板情況等等,詳細點才好幫你分析
19樓2012-03-03 09:19:22
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feng__

金蟲 (著名寫手)



Icityman(金幣+1): 謝謝參與
模板有問題吧,跑下模板噻
20樓2012-05-16 11:03:07
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elbo

金蟲 (小有名氣)



Icityman(金幣+1): 謝謝參與
模板出問題的可能性很大
21樓2012-05-17 07:34:22
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lihongyue328

新蟲 (初入文壇)



Icityman(金幣+1): 謝謝參與
親,這不是拖尾哦,沒有p出來目的條帶
22樓2013-06-04 17:06:30
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沒想好名字

新蟲 (初入文壇)



Icityman(金幣+1): 謝謝參與
這不是拖尾,因為壓根就沒有主條帶。分析原因:1.模板分解了,且濃度過高2.引物的特異性太差3.退火溫度過低,可采用Tm-10x5+Tm-2x30試試,并逐漸改變退火溫度。
23樓2015-05-08 11:21:58
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mataomatao

禁蟲 (正式寫手)


Icityman(金幣+1): 謝謝參與
本帖內(nèi)容被屏蔽

24樓2015-05-09 09:50:27
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