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[求助]
FAM-miRNA轉(zhuǎn)染小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞觀察不到熒光 已有3人參與
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本人用FAM-miRNA轉(zhuǎn)染mMSCs，轉(zhuǎn)染試劑是用的Invitrogen公司的lipo2000，轉(zhuǎn)染步驟也是按照說明書做的。lipo2000和miRNA孵育的過程用的是不含血清的完全培養(yǎng)基而不是優(yōu)化培養(yǎng)基，但這個(gè)影響不大吧？也說可以用不含血清的完全培養(yǎng)基的對(duì)吧~接種的細(xì)胞的密度是4萬(wàn)/孔（24孔板）。孵育了4~5個(gè)小時(shí)，用熒光顯微鏡觀察，看不到熒光，但是背底的熒光很強(qiáng)。FAM-miRNA是用的公司合成的，應(yīng)該沒問題。想請(qǐng)教一下各位，問題出在哪兒了？再有，想請(qǐng)教一下大家干細(xì)胞轉(zhuǎn)染與其他細(xì)胞轉(zhuǎn)染的一些區(qū)別，因?yàn)榭促Y料干細(xì)胞轉(zhuǎn)染要比其他細(xì)胞類型難一些對(duì)吧？謝謝各位啦~~ |
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3樓2014-02-25 14:46:32
2樓2014-02-25 12:56:35
jurkat.1640
至尊木蟲 (文壇精英)
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4樓2014-02-25 15:38:07
alxz
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-02-25 21:52:10
米老鼠的樹: 金幣+5, ★有幫助 2014-02-26 12:56:40
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米老鼠的樹: 金幣+5, ★有幫助 2014-02-26 12:56:40
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你用的是帶熒光的miRNA，而非細(xì)胞自發(fā)熒光 用熒光顯微鏡觀測(cè)前，要排除載miRNA的liposome的干擾 建議觀測(cè)時(shí)間定為8h，觀測(cè)前換液操作中多用PBS洗幾次細(xì)胞 如果miRNA已進(jìn)入細(xì)胞的話，洗滌多次也不會(huì)影響 |
5樓2014-02-25 20:29:22
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