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alman001銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
農(nóng)作物轉(zhuǎn)基因植株檢測遇到問題
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本人做轉(zhuǎn)基因沉默植株檢測，由于轉(zhuǎn)的基因?yàn)橹参飪?nèi)源基因，所以設(shè)計(jì)的pcr檢測引物為沉默載體上的序列（35s的一部分+bar基因的一部分，沒有所轉(zhuǎn)基因的特異性序列，沉默載體為pFGC5941），在檢測的時(shí)候遇到了問題： 第一次，我用的是全式金的EASYtaq酶，從本作物的兩個(gè)野生型品種中沒有擴(kuò)增到條帶，擬轉(zhuǎn)基因株系中有的能擴(kuò)增出來目的條帶，有的沒有（而且從每個(gè)基因構(gòu)建好的載體上也能很好地?cái)U(kuò)增出目的條帶，說明引物設(shè)計(jì)得應(yīng)該沒有問題），當(dāng)時(shí)我覺得結(jié)果比較滿意。 第二次，為了驗(yàn)證這對檢測引物好用，我又用Takara的rTaq酶對同樣的野生型和擬轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行了檢測，pcr條件和第一次一樣，結(jié)果幾乎得到的擬轉(zhuǎn)基因株系都能擴(kuò)出相應(yīng)的目的條帶，更奇葩的是，從兩個(gè)本作物的野生型品種中也擴(kuò)增到了相同的目的條帶，我就很郁悶。 而且之前我也根據(jù)同樣的沉默載體設(shè)計(jì)過檢測引物（至少有一條正向或反向引物為植物不含有的35s或bar序列），也經(jīng)常能在野生型中擴(kuò)增出目的條帶，相當(dāng)郁悶。 論壇里有木有同道做過這個(gè)載體的轉(zhuǎn)基因植株檢測，大家?guī)臀曳治鲆幌率裁丛虬�，謝啦！ |
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3樓2017-08-31 15:11:23
bired
木蟲 (著名寫手)
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- 專業(yè): 作物分子育種
2樓2014-03-15 15:25:47
jeff005
新蟲 (初入文壇)
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- 帖子: 6
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- 蟲號(hào): 7183575
- 注冊: 2017-09-14
- 專業(yè): 植物化學(xué)保護(hù)
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我的理解是，可以考慮污染，但是對于沉默而言，你做pcr擴(kuò)增只能說明它是不是轉(zhuǎn)基因的，究竟是不是起到沉默的效果，還得看轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平吧 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
4樓2017-09-14 13:44:54
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