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山西小愚銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
粗酶液以ABTS為底物測定漆酶活性，死活感覺測不到酶活力。求指點(diǎn)！�。� 已有3人參與
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正在培育一株產(chǎn)漆酶的菌，可以降解部分有機(jī)物，粗酶液上清液用ABTS水溶液為底物1mM濃度檢測，ABTS水溶液呈現(xiàn)淡藍(lán)色。從美國Sigma公司買的。但是反應(yīng)十分鐘OD與空白比較只是增加了0.1。粗酶液蛋白總含量是19mg/ml.緩沖液PH4.5 菌體破碎上清液、沉淀、培養(yǎng)基都測了。只有上清在OD420處還稍微有點(diǎn)變化，十分鐘OD增加只是0.1.怎么測都不行。求指點(diǎn)。謝謝�。�！ |
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4樓2015-05-26 22:38:44
reallpf
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
dllchina: 金幣+3, 鼓勵(lì)熱心應(yīng)助 2014-03-06 18:48:11
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你的粗酶液是發(fā)酵上清還是細(xì)胞破碎后的上清？ 測定酶活力前，應(yīng)該跑個(gè)SDS-PAGE看看，別你的蛋白都沒有或者濃度特別低還在那反復(fù)測。你測定的是總蛋白含量，說明不了什么問題。 漆酶都已經(jīng)是幾年前的熱點(diǎn)了，測定酶活的方式還是比較成熟的。將底物摻到瓊脂平板中，滴加粗酶液，看是否能形成透明圈（需要染色）。 另外你的粗酶液是發(fā)酵罐還是搖瓶得到的？搖瓶酶活應(yīng)該很低吧，很難測得到。而且你粗酶液沒有除鹽，也沒有濃縮�？梢钥紤]超薄切向流除鹽，然后透析膜濃縮，再測酶活。 |
2樓2014-03-06 15:04:14
山西小愚
銀蟲 (初入文壇)
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3樓2014-03-06 17:26:58
louchunxia
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5樓2015-09-10 17:22:12
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