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山西小愚銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
粗酶液以ABTS為底物測(cè)定漆酶活性，死活感覺測(cè)不到酶活力。求指點(diǎn)�。�！ 已有3人參與
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正在培育一株產(chǎn)漆酶的菌，可以降解部分有機(jī)物，粗酶液上清液用ABTS水溶液為底物1mM濃度檢測(cè)，ABTS水溶液呈現(xiàn)淡藍(lán)色。從美國(guó)Sigma公司買的。但是反應(yīng)十分鐘OD與空白比較只是增加了0.1。粗酶液蛋白總含量是19mg/ml.緩沖液PH4.5 菌體破碎上清液、沉淀、培養(yǎng)基都測(cè)了。只有上清在OD420處還稍微有點(diǎn)變化，十分鐘OD增加只是0.1.怎么測(cè)都不行。求指點(diǎn)。謝謝！�。� |
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reallpf
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
dllchina: 金幣+3, 鼓勵(lì)熱心應(yīng)助 2014-03-06 18:48:11
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
dllchina: 金幣+3, 鼓勵(lì)熱心應(yīng)助 2014-03-06 18:48:11
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你的粗酶液是發(fā)酵上清還是細(xì)胞破碎后的上清？ 測(cè)定酶活力前，應(yīng)該跑個(gè)SDS-PAGE看看，別你的蛋白都沒(méi)有或者濃度特別低還在那反復(fù)測(cè)。你測(cè)定的是總蛋白含量，說(shuō)明不了什么問(wèn)題。 漆酶都已經(jīng)是幾年前的熱點(diǎn)了，測(cè)定酶活的方式還是比較成熟的。將底物摻到瓊脂平板中，滴加粗酶液，看是否能形成透明圈（需要染色）。 另外你的粗酶液是發(fā)酵罐還是搖瓶得到的？搖瓶酶活應(yīng)該很低吧，很難測(cè)得到。而且你粗酶液沒(méi)有除鹽，也沒(méi)有濃縮�？梢钥紤]超薄切向流除鹽，然后透析膜濃縮，再測(cè)酶活。 |
2樓2014-03-06 15:04:14
山西小愚
銀蟲 (初入文壇)
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謝謝你，我的是搖瓶24小時(shí)的，細(xì)胞破碎后上清液，一直都測(cè)不到不敢直接去克隆。我再試試平板，老板讓直接克隆表達(dá)了看看有沒(méi)有活力。還有Sigma公司那個(gè)ABTS藥品標(biāo)簽質(zhì)量是10毫克，然后我電子天平顯示大于這個(gè)質(zhì)量，幾乎是30毫克這樣子，我就電子天平的稱了。不知道這個(gè)有遇到過(guò)沒(méi)，還是他們公司標(biāo)記有什么換算嗎？文獻(xiàn)說(shuō)ABTS水溶液可以存放在四度避光6個(gè)月，不知道有測(cè)過(guò)嗎？能放那么長(zhǎng)時(shí)間嗎？謝謝��！ |
3樓2014-03-06 17:26:58
4樓2015-05-26 22:38:44
louchunxia
木蟲 (初入文壇)
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請(qǐng)問(wèn)abts加到Tris-ac的緩沖溶液（硝酸銀 硝酸鉀 ph 7.4）中出現(xiàn)沉淀是為什么呀 中間會(huì)反應(yīng)嗎 可是單獨(dú)配成溶液加abts進(jìn)去又沒(méi)問(wèn)題 之前打算直接用這個(gè)緩沖溶液溶解發(fā)現(xiàn)也不行 求指點(diǎn) 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2019-08-04 14:13:09
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