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山西小愚銀蟲 (初入文壇)
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[求助]
粗酶液以ABTS為底物測定漆酶活性，死活感覺測不到酶活力。求指點！��！ 已有3人參與
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正在培育一株產(chǎn)漆酶的菌，可以降解部分有機物，粗酶液上清液用ABTS水溶液為底物1mM濃度檢測，ABTS水溶液呈現(xiàn)淡藍色。從美國Sigma公司買的。但是反應十分鐘OD與空白比較只是增加了0.1。粗酶液蛋白總含量是19mg/ml.緩沖液PH4.5 菌體破碎上清液、沉淀、培養(yǎng)基都測了。只有上清在OD420處還稍微有點變化，十分鐘OD增加只是0.1.怎么測都不行。求指點。謝謝�。�！ |
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7樓2018-01-31 16:14:16
reallpf
木蟲 (正式寫手)
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- 專業(yè): 微生物生理與生物化學
【答案】應助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
dllchina: 金幣+3, 鼓勵熱心應助 2014-03-06 18:48:11
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你的粗酶液是發(fā)酵上清還是細胞破碎后的上清？ 測定酶活力前，應該跑個SDS-PAGE看看，別你的蛋白都沒有或者濃度特別低還在那反復測。你測定的是總蛋白含量，說明不了什么問題。 漆酶都已經(jīng)是幾年前的熱點了，測定酶活的方式還是比較成熟的。將底物摻到瓊脂平板中，滴加粗酶液，看是否能形成透明圈（需要染色）。 另外你的粗酶液是發(fā)酵罐還是搖瓶得到的？搖瓶酶活應該很低吧，很難測得到。而且你粗酶液沒有除鹽，也沒有濃縮�？梢钥紤]超薄切向流除鹽，然后透析膜濃縮，再測酶活。 |
2樓2014-03-06 15:04:14
山西小愚
銀蟲 (初入文壇)
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3樓2014-03-06 17:26:58
4樓2015-05-26 22:38:44
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