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圣迭戈銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
大神請進(jìn)，定量PCR的閾值問題 已有3人參與
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| 我發(fā)現(xiàn)閾值調(diào)高調(diào)低，最終的基因拷貝數(shù)會有很大的變化啊。那么閾值到底應(yīng)該是以什么標(biāo)準(zhǔn)來調(diào)整？到多少合適？ |
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atlanticwi
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2樓2014-03-07 10:16:42
wangweijian
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3樓2014-03-07 12:25:24
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| 讓軟件自動選就可以了，一般是第3到第15個(gè)循環(huán)的熒光信號的標(biāo)準(zhǔn)偏差的十倍。手動調(diào)的話，當(dāng)然不可能去算那個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差，只要選在指數(shù)擴(kuò)增開始階段就好了。雖然調(diào)整閾值會讓Ct值也跟著變動，但這個(gè)變化是所有的Ct值都跟著變的，各個(gè)Ct值之間的差異還是一樣的。也就是說，只要閾值設(shè)置是在指數(shù)擴(kuò)增區(qū)，調(diào)大點(diǎn)或者小點(diǎn)，最終的定量結(jié)果是差不多的。 |
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4樓2014-03-08 00:51:20
lvbobo823
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5樓2014-03-08 08:52:18
圣迭戈
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6樓2014-03-09 10:41:42
g0945111
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送紅花一朵 |
可是我還是有個(gè)問題，那既然閾值可以調(diào)-這樣對應(yīng)的Ct值就會不同，出來的定量結(jié)果就會不一樣，我們最終定量的意義不就在于看看這個(gè)模板到底有多少拷貝數(shù)，這個(gè)值肯定是一定的呀。那我們出來的結(jié)果怎么對比，是說多少個(gè)循環(huán)對應(yīng)下的它的拷貝數(shù)是多少這樣來比較么？若果所有的機(jī)器每次設(shè)定的閾值一個(gè)定值這個(gè)結(jié)果就確實(shí)有可比性，但這個(gè)可能性不大吧，每個(gè)設(shè)定的閾值是不一樣的。求賜教這個(gè)問題！謝謝 |
7樓2016-09-13 10:51:45
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