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monazhou001新蟲 (初入文壇)
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[求助]
熒光定量PCR—顯著性分析—應該用生物學重復還是三次實驗重復結果？ 已有2人參與
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我想比較對照，中度干旱，重度干旱下相關基因的表達是否存在顯著差異 我用的是ΔΔCT法，每個樣品都做了內參和目的基因，每種基因都做了復孔以減少誤差，用內參和目的基因CT值得到了ΔCT值 對照三次生物學重復分別叫1、2、3 中度干旱為4、5、6 重度7、8、9 我是應該： 將123取平均得到對照的RQ=1，然后用4的ΔCT減去123的平均ΔCT，得到4的ΔΔCT和RQ，依次類推得到56789的，然后用456的RQ值與對照比較做方差呢？ 還是應該將456也先取平均ΔCT，得到456的一個平均后的ΔΔCT和RQ，然后在做三次實驗重復，用456的三次重復的ΔΔCT和RQ做方差顯著性分析？ 我的生物學重復效果并不理想，三個重復里經常有一個樣品的RQ值明顯和另外兩個不一樣，或者有的時候三個值都有一定差距，做誤差棒的時候效果很差，不知道各位有沒有遇到過這樣的情況。 我試過實驗重復，兩次實驗重復中基因在不同處理中的表達趨勢幾乎沒有任何差別，該上調的還是上調，只是CT數值有區(qū)別，算出來的RQ有區(qū)別，但是和對照相比相對表達量的倍數沒有什么大區(qū)別，方差分析是不是應該用三次生物學重復來做呢？ 寫的有點多，謝謝大家！ |
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