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monazhou001新蟲 (初入文壇)
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熒光定量PCR—顯著性分析—應(yīng)該用生物學(xué)重復(fù)還是三次實驗重復(fù)結(jié)果? 已有2人參與
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我想比較對照,中度干旱,重度干旱下相關(guān)基因的表達(dá)是否存在顯著差異 我用的是ΔΔCT法,每個樣品都做了內(nèi)參和目的基因,每種基因都做了復(fù)孔以減少誤差,用內(nèi)參和目的基因CT值得到了ΔCT值 對照三次生物學(xué)重復(fù)分別叫1、2、3 中度干旱為4、5、6 重度7、8、9 我是應(yīng)該: 將123取平均得到對照的RQ=1,然后用4的ΔCT減去123的平均ΔCT,得到4的ΔΔCT和RQ,依次類推得到56789的,然后用456的RQ值與對照比較做方差呢? 還是應(yīng)該將456也先取平均ΔCT,得到456的一個平均后的ΔΔCT和RQ,然后在做三次實驗重復(fù),用456的三次重復(fù)的ΔΔCT和RQ做方差顯著性分析? 我的生物學(xué)重復(fù)效果并不理想,三個重復(fù)里經(jīng)常有一個樣品的RQ值明顯和另外兩個不一樣,或者有的時候三個值都有一定差距,做誤差棒的時候效果很差,不知道各位有沒有遇到過這樣的情況。 我試過實驗重復(fù),兩次實驗重復(fù)中基因在不同處理中的表達(dá)趨勢幾乎沒有任何差別,該上調(diào)的還是上調(diào),只是CT數(shù)值有區(qū)別,算出來的RQ有區(qū)別,但是和對照相比相對表達(dá)量的倍數(shù)沒有什么大區(qū)別,方差分析是不是應(yīng)該用三次生物學(xué)重復(fù)來做呢? 寫的有點多,謝謝大家! |
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