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wangdunzju新蟲 (小有名氣)
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[求助]
擬南芥蛋白互作非特異條帶怎么解決？
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各位蟲友好！ 最近在做擬南芥的蛋白互作時(shí)遇到問(wèn)題，請(qǐng)教大家： 用擬南芥葉片液氮磨樣，4度5000G離心5分后，用Pierce公司的Co-IP試劑盒做免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)，完全按照說(shuō)明書操作的，結(jié)果Control Gel（陰性對(duì)照組）中總是出現(xiàn)非特異性條帶，樣品組中的條帶與Control Gel（陰性對(duì)照組）中的條帶完全一樣！按說(shuō)陰性對(duì)照組里應(yīng)該沒(méi)有太明顯的條帶才對(duì)啊？但實(shí)際上Control Gel（陰性對(duì)照組）中的條帶十分明顯，就跟目的樣品中的一個(gè)樣，會(huì)不會(huì)是出廠時(shí)廠家把Control Gel裝錯(cuò)了呢（感覺(jué)可能性不大）？嘗試增加復(fù)合物的洗滌次數(shù)（到10次以上了）并且wash buffer 中有加入0.5%的triton X-100,都沒(méi)有效果。而且樣品也用Control Gel預(yù)處理了，都沒(méi)能解決問(wèn)題，陰性對(duì)照組的非特異性結(jié)合還是很強(qiáng)，這怎么辦呢？急啊�。�！   另外，抗體是兔抗血清，做Wb實(shí)驗(yàn)用過(guò)，特異性蠻好的�？梢噪s到43Kd的目的蛋白。 洗脫復(fù)合物的銀染如圖: 問(wèn)題： 1，如何減少陰性對(duì)照中的非特異性結(jié)合？ 2，看到的兩個(gè)主帶該不會(huì)是把抗體洗脫下來(lái)了吧？ Co-IP.jpg |
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wangdunzju
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2樓2014-03-27 15:38:48
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4樓2014-03-27 16:00:20
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