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wangdunzju新蟲 (小有名氣)
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[求助]
擬南芥蛋白互作非特異條帶怎么解決？
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各位蟲友好！ 最近在做擬南芥的蛋白互作時遇到問題，請教大家： 用擬南芥葉片液氮磨樣，4度5000G離心5分后，用Pierce公司的Co-IP試劑盒做免疫共沉淀實驗，完全按照說明書操作的，結果Control Gel（陰性對照組）中總是出現(xiàn)非特異性條帶，樣品組中的條帶與Control Gel（陰性對照組）中的條帶完全一樣！按說陰性對照組里應該沒有太明顯的條帶才對��？但實際上Control Gel（陰性對照組）中的條帶十分明顯，就跟目的樣品中的一個樣，會不會是出廠時廠家把Control Gel裝錯了呢（感覺可能性不大）？嘗試增加復合物的洗滌次數(shù)（到10次以上了）并且wash buffer 中有加入0.5%的triton X-100,都沒有效果。而且樣品也用Control Gel預處理了，都沒能解決問題，陰性對照組的非特異性結合還是很強，這怎么辦呢？急啊�。�！   另外，抗體是兔抗血清，做Wb實驗用過，特異性蠻好的�？梢噪s到43Kd的目的蛋白。 洗脫復合物的銀染如圖: 問題： 1，如何減少陰性對照中的非特異性結合？ 2，看到的兩個主帶該不會是把抗體洗脫下來了吧？ Co-IP.jpg |
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