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厚德求是木蟲 (著名寫手)
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[求助]
用試劑盒通過全質(zhì)粒PCR來做定點(diǎn)突變，導(dǎo)入不了感受態(tài)細(xì)胞，請幫我走出困境！ 已有5人參與
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先介紹一下我的試驗(yàn)情況： 就像題目所說，我的試驗(yàn)是對蛋白質(zhì)做定點(diǎn)突變，方法是設(shè)計(jì)突變引物，用全質(zhì)粒作為模板，在突變結(jié)束完成后用選擇性消化甲基化核酸的酶處理產(chǎn)物，然后利用熱擊法把核酸片段轉(zhuǎn)化導(dǎo)入感受態(tài)細(xì)胞中。 現(xiàn)在的問題是，全質(zhì)粒PCR是挺成功的，模板條帶大小正確，明亮清晰。可是用試劑盒提供的感受態(tài)細(xì)胞做轉(zhuǎn)化，就長不出單菌落，而是一大片薄薄的云霧一樣的東西，師兄說不對勁，可能失敗了�？墒俏乙呀�(jīng)重復(fù)了3次了，每次都是這種類似的情況！所以我想，是不是他的感受態(tài)有問題，現(xiàn)在想自己制備DH5α感受態(tài)細(xì)胞，把目標(biāo)質(zhì)粒導(dǎo)入這個(gè)感受態(tài)細(xì)胞，在它里面完成超螺旋的裝備，然后再導(dǎo)入我的目標(biāo)宿主中。 對了，我用的試劑盒是“TransGen”（貌似是北京的公司）的fast mutagenesis system，有沒有用過的朋友��？我覺得這個(gè)很不好用啊！是不是要換試劑盒啊？請了解情況和有過類似經(jīng)歷的朋友幫我！先謝謝了！  |
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