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摩羯的心

鐵蟲(chóng) (小有名氣)

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[求助] takara 熱啟動(dòng)酶已有3人參與

各位蟲(chóng)友誰(shuí)用過(guò)takara的熱啟動(dòng)酶，我之前用普通taq酶能P出來(lái)的樣品現(xiàn)在換成熱啟動(dòng)酶為什么P不出目的條帶了程序是：92度預(yù)變性4min ，92度 40s
58度 40s 72度 1min 30s，35個(gè)循環(huán)，最后72度延伸7min 大家?guī)兔Ψ治鍪窃趺椿厥履?

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1樓 2014-04-01 20:11:34

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cm8002

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摩羯的心: 金幣+1 2014-04-03 09:09:57

這個(gè)得仔細(xì)看看說(shuō)明書(shū)，我記得takara的高保真酶退火變性不需要那么長(zhǎng)時(shí)間，看你的目的基因長(zhǎng)度，應(yīng)該15s左右就差不多

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3樓2014-04-02 21:20:57

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lvbobo823

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摩羯的心(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-04-02 09:46:55
摩羯的心: 金幣+1 2014-04-03 09:10:03

酶就這樣，我們實(shí)驗(yàn)室有時(shí)用普通Taq擴(kuò)出來(lái)，用高保真酶擴(kuò)不出來(lái)。我們一般是用普通Taq酶擴(kuò)出來(lái)多送幾個(gè)樣測(cè)序，挑沒(méi)有突變的樣做下一步工作。

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hehe

2樓2014-04-02 09:33:53

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cxkhhh

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在50μl的反應(yīng)體系里， BIOGHC DNA Polymerase的用量最好不要低于1.5 U。PCR反應(yīng)開(kāi)始前，應(yīng)將反應(yīng)混合物95℃加熱6分鐘。一般地，反應(yīng)條件可設(shè)置為：95℃，30 sec；55℃，30sec；72℃，30sec (500bp以?xún)?nèi))。

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4樓2019-02-20 15:32:32

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你是路人甲

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熱啟動(dòng)TAQ酶經(jīng)過(guò)修飾，一般在95度加熱5-10分鐘活性中心才會(huì)暴露，才會(huì)產(chǎn)生聚合作用，熱啟動(dòng)TAQ酶對(duì)擴(kuò)增的特異性非常重要，但目前國(guó)內(nèi)能生產(chǎn)性能較好的熱啟動(dòng)TAQ酶的公司并不多，用的較多的主要有QIAGEN、BIOLINE、BIODAI等，建議樓主再提高些溫度

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5樓2019-03-28 15:55:14

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普通表情龍兔虎貓

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