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[求助]
蛋白質(zhì)純化 已有4人參與
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大家好，有幾個(gè)問(wèn)題向大家請(qǐng)教。 我的蛋白是短肽13KD,大腸表達(dá)，純化流程是SP-HIC-Desalting-Q，由于這個(gè)蛋白不穩(wěn)定，SP結(jié)果當(dāng)?shù)鞍缀扛哂?mg/ml時(shí)4度放置兩天就會(huì)出現(xiàn)渾濁，HIC由于使用的NaCl（硫酸銨會(huì)導(dǎo)致蛋白沉淀），不會(huì)出現(xiàn)沉淀，而由于要過(guò)Q柱出去內(nèi)毒素和核酸，所以要脫鹽，當(dāng)濃度高于1mg/ml在20mM PB中就會(huì)沉淀，很是頭疼。 PS:1. 請(qǐng)問(wèn)大家在這個(gè)實(shí)驗(yàn)流程中怎么不讓它沉淀， 2. 上柱子的Buffer中是不是可以添加什么東西呢,尤其是脫鹽過(guò)程，達(dá)到不沉淀的目的。 再次謝謝了，由于比較緊迫，請(qǐng)大家支支招吧。 |
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【答案】應(yīng)助回帖
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leezz(星海慧兒代發(fā)): 金幣+2, 多謝回帖交流 2014-04-18 09:49:35
leezz: 金幣+10, ★★★很有幫助 2014-04-23 13:16:27
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leezz: 金幣+10, ★★★很有幫助 2014-04-23 13:16:27
| 我們以前實(shí)驗(yàn)時(shí)可以再蛋白溶液里面加入0.1%的peg防治其高濃度凝聚，不知道對(duì)于你的蛋白是不是適用；而看你描述，你的蛋白好像不能離開(kāi)NaCl環(huán)境，就算要上Q柱也并不需要完全除去NaCl啊，可以試下，在低濃度下（如0.05M NaCl或者0.1M NaCl）下會(huì)不會(huì)沉淀，如果可以，你可以脫鹽，也可以直接稀釋，一些淺見(jiàn)，希望能有幫助 |
6樓2014-04-17 20:17:59
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