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[求助]
蛋白質(zhì)純化 已有4人參與
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大家好，有幾個問題向大家請教。 我的蛋白是短肽13KD,大腸表達，純化流程是SP-HIC-Desalting-Q，由于這個蛋白不穩(wěn)定，SP結(jié)果當?shù)鞍缀扛哂?mg/ml時4度放置兩天就會出現(xiàn)渾濁，HIC由于使用的NaCl（硫酸銨會導(dǎo)致蛋白沉淀），不會出現(xiàn)沉淀，而由于要過Q柱出去內(nèi)毒素和核酸，所以要脫鹽，當濃度高于1mg/ml在20mM PB中就會沉淀，很是頭疼。 PS:1. 請問大家在這個實驗流程中怎么不讓它沉淀， 2. 上柱子的Buffer中是不是可以添加什么東西呢,尤其是脫鹽過程，達到不沉淀的目的。 再次謝謝了，由于比較緊迫，請大家支支招吧。 |
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2樓2014-04-08 13:44:27
yingshi0703
金蟲 (小有名氣)
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3樓2014-04-08 16:05:00
leezz4樓2014-04-08 16:24:32
5樓2014-04-08 20:33:52
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
leezz(星海慧兒代發(fā)): 金幣+2, 多謝回帖交流 2014-04-18 09:49:35
leezz: 金幣+10, ★★★很有幫助 2014-04-23 13:16:27
leezz(星海慧兒代發(fā)): 金幣+2, 多謝回帖交流 2014-04-18 09:49:35
leezz: 金幣+10, ★★★很有幫助 2014-04-23 13:16:27
| 我們以前實驗時可以再蛋白溶液里面加入0.1%的peg防治其高濃度凝聚，不知道對于你的蛋白是不是適用；而看你描述，你的蛋白好像不能離開NaCl環(huán)境，就算要上Q柱也并不需要完全除去NaCl啊，可以試下，在低濃度下（如0.05M NaCl或者0.1M NaCl）下會不會沉淀，如果可以，你可以脫鹽，也可以直接稀釋，一些淺見，希望能有幫助 |
6樓2014-04-17 20:17:59
7樓2014-04-17 22:49:31
本人越覺得這個蛋白未來前景不怎么地，目前來看太不穩(wěn)定了，關(guān)鍵不是咱們投資做這東西，有人愿意出錢搞，也只好做下去了，謝謝了。 8樓2014-04-23 13:19:13
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