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weiing銅蟲 (小有名氣)
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細(xì)胞培養(yǎng)
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本人在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)過程中，前期細(xì)胞密度均處于非常好的狀態(tài)，細(xì)胞活率也一直維持在98%以上，在培養(yǎng)最后一天,細(xì)胞活率極具下降，一天之內(nèi)從98%下降到60%左右，培養(yǎng)結(jié)束，整個培養(yǎng)基本無平臺期，導(dǎo)致產(chǎn)量受到影響。 細(xì)胞株：CHO-S 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：商業(yè)化培養(yǎng)基 補(bǔ)料培養(yǎng)基：商業(yè)化培養(yǎng)基 接種密度：0.4-0.6*10^6cells/mL 最高細(xì)胞密度（day7-8）13*10^6cells/mL 達(dá)到細(xì)胞最高密度后能維持1-2天后，細(xì)胞大量死亡。 已做工作：降溫（降溫對延長時(shí)間無改善） 氨基酸分析（現(xiàn)有數(shù)據(jù)表明氨基酸均處于比較合理狀態(tài)，至少沒有極度缺乏氨基酸） 增加補(bǔ)料體積（無改善） 在基礎(chǔ)與補(bǔ)料中加植物水解物（微量增加產(chǎn)量，但對于培養(yǎng)時(shí)間延長無影響） |
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樓主的細(xì)胞培養(yǎng)幾天后活率下降？ 不管是哪種細(xì)胞，培養(yǎng)幾天后，狀態(tài)都會變差，此時(shí)需要重新傳代。沒有哪種細(xì)胞可以維持?jǐn)?shù)天狀態(tài)依然良好。 對于大多數(shù)CHO細(xì)胞來說，三天后細(xì)胞狀態(tài)都會下降，樓主已經(jīng)做到七八天，已經(jīng)是相當(dāng)長的時(shí)間了。 如果細(xì)胞密度已經(jīng)夠高了，就可以傳代并擴(kuò)大體系，或者凍存?zhèn)溆谩?br /> 如果細(xì)胞密度不高，可以考慮消化貼壁細(xì)胞，離心換新培養(yǎng)基，讓細(xì)胞重新貼壁生長，有可能會改善狀態(tài)。 |
2樓2014-04-10 06:15:53
weiing
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3樓2014-04-10 08:22:13
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4樓2014-04-11 13:40:25
wangyue115
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5樓2014-04-11 13:42:03
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6樓2014-04-11 20:53:10
wangyue115
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7樓2014-04-12 01:52:05
小周
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看你的數(shù)據(jù)，你的細(xì)胞生長是沒有問題的，Max Vc 也可以。 你的這株細(xì)胞在 simple batch 培養(yǎng)時(shí)的狀態(tài)怎么樣，在培養(yǎng)的后期會不會突然死亡？ 細(xì)胞生產(chǎn)的蛋白是什么？ 對細(xì)胞有毒性嗎？ 沒有看到你的Gluc 和Gln 的數(shù)據(jù)，這兩個在培養(yǎng)后期耗盡了嗎？ 如果沒有以上問題，說明這是這株細(xì)胞的特性。我以前遇到過CHO-S來源的細(xì)胞是這個樣子，在培養(yǎng)的后期“猝死”。針對這種細(xì)胞做工藝，我認(rèn)為主要提高細(xì)胞的 Max Vc ,延長細(xì)胞的生長時(shí)間。 另外，我想問一下你的降溫時(shí)怎么做的，怎么會沒有作用呢？ |
8樓2014-04-12 09:31:34
weiing
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第一：細(xì)胞密度有繼續(xù)上升的空間，主要是死的太快用溫度限制其生長了。 第二：細(xì)胞生長的為抗體，一般經(jīng)驗(yàn)而言對細(xì)胞沒有毒性 第三：葡萄糖是肯定沒有耗盡的，gln是一直有流加，但是glumate一直在累積，證明不能進(jìn)入TCA循環(huán)，實(shí)際上流加多了。 第四：后期猝死，我覺得還是營養(yǎng)不夠，不知道是那種限制性成分 第五：CHO-S對溫度不敏感，即使降溫到32度，其倍增時(shí)間也不超過20小時(shí)，但是比較影響表達(dá)。也會在后期出現(xiàn)猝死現(xiàn)象。 降溫常規(guī)這做做的：一般讓細(xì)胞長到一定密度（由批培養(yǎng)稍微摸一下數(shù)據(jù)0），然后降溫讓維持一定密度，也慢慢死下去。但是這個不符合該情況 |
9樓2014-04-13 20:36:38
小周
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根據(jù)你的推論，細(xì)胞猝死是因?yàn)槟骋环N或幾種營養(yǎng)成分的缺乏。它（它們）在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中存在，而補(bǔ)料培養(yǎng)基中缺乏，或是沒有，因此造成了培養(yǎng)后期營養(yǎng)的缺乏。 換種補(bǔ)料培養(yǎng)基試試。 取少量培養(yǎng)后期細(xì)胞（猝死前一兩天），離心后，用等量基礎(chǔ)培養(yǎng)基重懸一下，放搖瓶中培養(yǎng)，看看細(xì)胞會不會死。不處理的做對照。（該方法不一定能行，細(xì)胞可能已經(jīng)進(jìn)入凋亡） |
10樓2014-04-13 21:23:52
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