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weiing銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
細胞培養(yǎng)
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本人在實驗室培養(yǎng)過程中，前期細胞密度均處于非常好的狀態(tài)，細胞活率也一直維持在98%以上，在培養(yǎng)最后一天,細胞活率極具下降，一天之內(nèi)從98%下降到60%左右，培養(yǎng)結(jié)束，整個培養(yǎng)基本無平臺期，導(dǎo)致產(chǎn)量受到影響。 細胞株：CHO-S 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：商業(yè)化培養(yǎng)基 補料培養(yǎng)基：商業(yè)化培養(yǎng)基 接種密度：0.4-0.6*10^6cells/mL 最高細胞密度（day7-8）13*10^6cells/mL 達到細胞最高密度后能維持1-2天后，細胞大量死亡。 已做工作：降溫（降溫對延長時間無改善） 氨基酸分析（現(xiàn)有數(shù)據(jù)表明氨基酸均處于比較合理狀態(tài)，至少沒有極度缺乏氨基酸） 增加補料體積（無改善） 在基礎(chǔ)與補料中加植物水解物（微量增加產(chǎn)量，但對于培養(yǎng)時間延長無影響） |
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樓主的細胞培養(yǎng)幾天后活率下降？ 不管是哪種細胞，培養(yǎng)幾天后，狀態(tài)都會變差，此時需要重新傳代。沒有哪種細胞可以維持數(shù)天狀態(tài)依然良好。 對于大多數(shù)CHO細胞來說，三天后細胞狀態(tài)都會下降，樓主已經(jīng)做到七八天，已經(jīng)是相當(dāng)長的時間了。 如果細胞密度已經(jīng)夠高了，就可以傳代并擴大體系，或者凍存?zhèn)溆谩?br /> 如果細胞密度不高，可以考慮消化貼壁細胞，離心換新培養(yǎng)基，讓細胞重新貼壁生長，有可能會改善狀態(tài)。 |
2樓2014-04-10 06:15:53
weiing
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3樓2014-04-10 08:22:13
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4樓2014-04-11 13:40:25
wangyue115
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5樓2014-04-11 13:42:03
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6樓2014-04-11 20:53:10
wangyue115
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7樓2014-04-12 01:52:05
小周
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看你的數(shù)據(jù)，你的細胞生長是沒有問題的，Max Vc 也可以。 你的這株細胞在 simple batch 培養(yǎng)時的狀態(tài)怎么樣，在培養(yǎng)的后期會不會突然死亡？ 細胞生產(chǎn)的蛋白是什么？ 對細胞有毒性嗎？ 沒有看到你的Gluc 和Gln 的數(shù)據(jù)，這兩個在培養(yǎng)后期耗盡了嗎？ 如果沒有以上問題，說明這是這株細胞的特性。我以前遇到過CHO-S來源的細胞是這個樣子，在培養(yǎng)的后期“猝死”。針對這種細胞做工藝，我認為主要提高細胞的 Max Vc ,延長細胞的生長時間。 另外，我想問一下你的降溫時怎么做的，怎么會沒有作用呢？ |
8樓2014-04-12 09:31:34
weiing
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第一：細胞密度有繼續(xù)上升的空間，主要是死的太快用溫度限制其生長了。 第二：細胞生長的為抗體，一般經(jīng)驗而言對細胞沒有毒性 第三：葡萄糖是肯定沒有耗盡的，gln是一直有流加，但是glumate一直在累積，證明不能進入TCA循環(huán)，實際上流加多了。 第四：后期猝死，我覺得還是營養(yǎng)不夠，不知道是那種限制性成分 第五：CHO-S對溫度不敏感，即使降溫到32度，其倍增時間也不超過20小時，但是比較影響表達。也會在后期出現(xiàn)猝死現(xiàn)象。 降溫常規(guī)這做做的：一般讓細胞長到一定密度（由批培養(yǎng)稍微摸一下數(shù)據(jù)0），然后降溫讓維持一定密度，也慢慢死下去。但是這個不符合該情況 |
9樓2014-04-13 20:36:38
小周
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10樓2014-04-13 21:23:52
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