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yanlili
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[求助]
關(guān)于DNase 已有2人參與
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| 最近用到DNase I來去除DNA, 在網(wǎng)上查到需要加輔酶Ca, Mg離子,結(jié)果發(fā)現(xiàn)加了以后經(jīng)常會出現(xiàn)沉淀,我認(rèn)為是原液里有CO3離子的原因,產(chǎn)生了碳酸鈣,但是這樣把我溶液中的一些蛋白質(zhì)也吸走了,這是我不希望的。有個(gè)同學(xué)說她們以前用DNaSE好像沒有加這些離子,所以我想問到底需不需要加?有不需要加的話是什么酶,哪個(gè)公司的。 |
專家顧問 (正式寫手)
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最初來自牛胰腺的DNaseI((E.C.3.1.21.1),是高度Mg2+和Ca2+依賴的,各種公司的產(chǎn)品都是這樣。 一些公司出過改良版,現(xiàn)在最有名的應(yīng)該是invitrogen的TubroDNase,從這個(gè)酶的產(chǎn)品說明看,通過改良DNaseI的催化中心,提高了對DNA的親和力(Km),同時(shí)提高了DNaseI對一價(jià)鹽離子的抵抗力。 但是其實(shí)也只字未提二價(jià)離子依賴性的問題。不過,因?yàn)門ubroDNase活力較傳統(tǒng)酶極大提高,我現(xiàn)在在一些體系下就直接加酶不加buffer,體系中也沒有太多二價(jià)離子。 工具酶中還可以切DNA的,只剩下S1 nuclease和Micrococcal Nuclease,嚴(yán)格說來這兩個(gè)酶并不區(qū)分RNA和DNA,并且一個(gè)依賴Zn2+,一個(gè)依賴Ca2+。 |
木蟲 (著名寫手)
專家顧問 (正式寫手)
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