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yanlili
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[求助]
關(guān)于DNase 已有2人參與
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| 最近用到DNase I來(lái)去除DNA， 在網(wǎng)上查到需要加輔酶Ca， Mg離子，結(jié)果發(fā)現(xiàn)加了以后經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)沉淀，我認(rèn)為是原液里有CO3離子的原因，產(chǎn)生了碳酸鈣，但是這樣把我溶液中的一些蛋白質(zhì)也吸走了，這是我不希望的。有個(gè)同學(xué)說(shuō)她們以前用DNaSE好像沒(méi)有加這些離子，所以我想問(wèn)到底需不需要加？有不需要加的話是什么酶，哪個(gè)公司的。 |
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biostar2009
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
yanlili(西門(mén)吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-04-14 10:29:41
yanlili: 金幣+6, ★★★★★最佳答案 2014-04-14 10:31:28
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最初來(lái)自牛胰腺的DNaseI（(E.C.3.1.21.1），是高度Mg2+和Ca2+依賴(lài)的，各種公司的產(chǎn)品都是這樣。 一些公司出過(guò)改良版，現(xiàn)在最有名的應(yīng)該是invitrogen的TubroDNase，從這個(gè)酶的產(chǎn)品說(shuō)明看，通過(guò)改良DNaseI的催化中心，提高了對(duì)DNA的親和力（Km），同時(shí)提高了DNaseI對(duì)一價(jià)鹽離子的抵抗力。 但是其實(shí)也只字未提二價(jià)離子依賴(lài)性的問(wèn)題。不過(guò)，因?yàn)門(mén)ubroDNase活力較傳統(tǒng)酶極大提高，我現(xiàn)在在一些體系下就直接加酶不加buffer，體系中也沒(méi)有太多二價(jià)離子。 工具酶中還可以切DNA的，只剩下S1 nuclease和Micrococcal Nuclease，嚴(yán)格說(shuō)來(lái)這兩個(gè)酶并不區(qū)分RNA和DNA，并且一個(gè)依賴(lài)Zn2+，一個(gè)依賴(lài)Ca2+。 |
2樓2014-04-13 19:31:25
Neo2000
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3樓2014-04-13 19:42:04
biostar2009
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4樓2014-04-13 20:00:05
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