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藍(lán)默兒金蟲 (小有名氣)
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[求助]
腹水，辛酸-硫酸銨純化 已有2人參與
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腹水亞型是IgG1，純化之前測(cè)其濃度為20毫克/毫升，純化測(cè)其濃度為800微克/毫升，重復(fù)做了兩次 具體步驟為： 1、 離心。12000rpm，5min，取上清于小燒杯中。 2、上清用0.45nm濾膜過(guò)濾。 3、加4倍體積PH4.5的醋酸緩沖液，邊加邊攪拌。 4、混合后，按每毫升稀釋腹水加33ul的正辛酸，邊加邊攪拌。 5、室溫?cái)嚢?0min，，取出12000rpm，離心30分鐘，棄沉淀。 6、上清用0.45nm濾膜過(guò)濾，濾液調(diào)PH=7.4. 7、加入飽和硫酸銨至45%飽和度，攪拌30分，4°過(guò)夜或5小時(shí)以上。 8、4° ，12000rpm，離心30分鐘棄上清保留沉淀， 9、10mMTris （PH=9.0）重懸沉淀，用透析卡進(jìn)行透析過(guò)夜4°， 10、4°，12000rpm，5min取上清，定容，測(cè)下濃度。 別的實(shí)驗(yàn)室按次方法做沒(méi)問(wèn)題，就是第6步，我用濾膜過(guò)濾，他用濾紙過(guò)濾。不知為什么我的濃度好低  ，求高手指點(diǎn) |
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