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藍(lán)默兒金蟲 (小有名氣)
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[求助]
腹水,辛酸-硫酸銨純化 已有2人參與
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腹水亞型是IgG1,純化之前測其濃度為20毫克/毫升,純化測其濃度為800微克/毫升,重復(fù)做了兩次 具體步驟為: 1、 離心。12000rpm,5min,取上清于小燒杯中。 2、上清用0.45nm濾膜過濾。 3、加4倍體積PH4.5的醋酸緩沖液,邊加邊攪拌。 4、混合后,按每毫升稀釋腹水加33ul的正辛酸,邊加邊攪拌。 5、室溫?cái)嚢?0min,,取出12000rpm,離心30分鐘,棄沉淀。 6、上清用0.45nm濾膜過濾,濾液調(diào)PH=7.4. 7、加入飽和硫酸銨至45%飽和度,攪拌30分,4°過夜或5小時(shí)以上。 8、4° ,12000rpm,離心30分鐘棄上清保留沉淀, 9、10mMTris (PH=9.0)重懸沉淀,用透析卡進(jìn)行透析過夜4°, 10、4°,12000rpm,5min取上清,定容,測下濃度。 別的實(shí)驗(yàn)室按次方法做沒問題,就是第6步,我用濾膜過濾,他用濾紙過濾。不知為什么我的濃度好低 ,求高手指點(diǎn) |

金蟲 (正式寫手)

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