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scqwdq123新蟲 (小有名氣)
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[求助]
細(xì)菌原生質(zhì)體提取 已有1人參與
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哪位蟲友做過革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌的原生質(zhì)體提取呢？我不做融合什么的，只要提取出來即可，非微生物專業(yè)，不懂得還請大家?guī)蛶兔?img src="https://muchongimg.xmcimg.com/data/emuch_bbs_images/smilies/hand.gif" align="absmiddle" border="0"> 謝謝~~~ |
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xiaoamuchong
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scqwdq123: 金幣+4 2014-04-29 09:44:28
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scqwdq123: 金幣+4 2014-04-29 09:44:28
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革蘭氏陽性菌株取5 mL 菌懸液，加入5 mL 溶菌酶溶液，溶菌酶濃度為100 ug/mL，混勻后于36℃水浴保溫處理30 min，定時取樣，鏡檢觀察原生質(zhì)體形成情況，當(dāng)95%以上細(xì)胞變成球狀原生質(zhì)體時，用4000 r/min 離心10 min，棄上清液，用高滲緩沖液洗滌除酶，然后將原生質(zhì)體懸浮于5 mL 高滲緩沖液中。 革蘭氏陰性菌要獲得其原生質(zhì)體要比陽性菌復(fù)雜得多，因為其細(xì)胞壁不僅有肽聚糖，還有脂多糖等等。 一般來說要獲得其原生質(zhì)體需要在培養(yǎng)細(xì)菌過程中加入足夠量的EDTA以此來激活其細(xì)胞壁對于溶菌酶的活性，再用溶菌酶來處理獲得。用來研究用的革蘭氏陰性菌一般被制成球狀體（原生質(zhì)球），即保留一部分細(xì)胞壁的革蘭氏陰性菌。 可參考：不同因素對兩株細(xì)菌原生質(zhì)體制備的影響 作者：鄭重誼 |
2樓2014-04-28 17:26:02
scqwdq123
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3樓2014-04-29 09:43:57
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