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心月之星新蟲 (初入文壇)
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CTAB法提取植物DNA 已有5人參與
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| 用CTAB法提取植物DNA ,用異丙醇沉淀后總是沒有絮狀沉淀出現(xiàn)，請問一下大家是什么原因？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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心月之星(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-05-07 15:24:25
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心月之星(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-05-07 15:24:25
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原因太多了，希望樓主能夠說的詳細(xì)一點。異丙醇沉淀沒有東西90%是因為前面的提取過程中不小心丟失了，因為總DNA的量其實是非常大的，不會出現(xiàn)RNA提取的時候沉淀不下來的狀況，而且雖然我們說前面有些步驟不要太劇烈，但是那主要還是怕使DNA斷裂對后續(xù)實驗造成影響，對抽提本身影響沒那么大。 最大的可能性有幾種 1.材料選取的新不新鮮，研磨的充分不充分，液氮研磨之后有沒有及時加入裂解緩沖液（研磨和裂解這部非常關(guān)鍵，80%的時候做不出來沒東西都是這一步?jīng)]做好） 2.選取材料DNA酶是不是很多，如果多的話，研磨解凍之前加入的裂解緩沖液中，螯合劑等抑制酶活性的物質(zhì)的量應(yīng)該提高。 3.CTAB等需要預(yù)熱的物質(zhì)，有沒有預(yù)熱好，需要保持溫度的步驟溫度是不是夠 4.酚仿異戊醇抽提次數(shù)是不是太多，除蛋白的時候收集的上清量是不是太少 5.實驗流程是不是太長，或者某些步驟混勻的太過激烈 |
3樓2014-05-07 11:28:59
心月之星
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7樓2014-05-07 15:12:22
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9樓2014-05-07 19:19:11
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2樓2014-05-07 10:25:55
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5樓2014-05-07 14:55:54
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6樓2014-05-07 15:08:55
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異丙醇必須在-20℃下預(yù)冷，然后加完放冰箱-20℃ 20min以上 ， 你這么做下試試吧， 肯定能行 8樓2014-05-07 19:17:59
10樓2014-05-10 22:53:37
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