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[求助]
關(guān)于液相色譜條件 出峰很寬 很低 已有1人參與
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我做的是嘌呤的色譜分析，查文獻(xiàn)的色譜條件是： 柱溫：30℃ 流速：1 流動(dòng)相：0.02mol/L甲酸銨 pH=3.6 色譜柱：C18（150*4.6） 進(jìn)樣量：10μL 波長(zhǎng)：254 圖中最后一個(gè)是腺嘌呤 這是標(biāo)準(zhǔn)品的出圖 感覺很差 不知道怎么調(diào) 希望高手給與指點(diǎn) 純 甲酸銨.JPG |
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raulsam1984
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2樓2014-05-14 09:45:16
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果斷在這里先謝謝您，但我還有幾點(diǎn)疑問請(qǐng)教您 1、流動(dòng)相條件是甲酸銨溶液，pH=3.6，調(diào)節(jié)酸堿度的話,您認(rèn)為上調(diào)到多大合適呢？ 2、出現(xiàn)這種情況與色譜柱有沒有關(guān)系，因?yàn)榱鲃?dòng)相是純水相，對(duì)柱子要求比較嚴(yán)格，是否存在色譜柱無(wú)法很好保留的問題呢 3、您所說的三乙胺應(yīng)該是顯堿性，我是用甲酸將pH調(diào)低到3.6的（初始甲酸銨溶液pH4.5左右），那您建議的三乙胺除了調(diào)節(jié)酸堿度方面發(fā)揮作用外，其他方面有幫助嗎？ 問題有點(diǎn)瑣碎，希望得到您的細(xì)心解答，事關(guān)本人課題大事，再次感謝您的耐心回到 |
3樓2014-05-14 16:05:55
raulsam1984
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樓主你好。關(guān)于你的問題，我這樣回答吧：1、由于不知道你的嘌呤的pKa（電離常數(shù)）是多少，但由于嘌呤應(yīng)該呈堿性，所以覺得你流動(dòng)相的pH值有點(diǎn)低，你把pH值調(diào)到pKa值的±2，應(yīng)該就可以了，但要注意對(duì)前面峰的影響。2、如果你是純水相的流動(dòng)相，只能用親水柱（HILIC），但我比較奇怪，我在網(wǎng)上看過一些文獻(xiàn)，分離這些化合物，都會(huì)有加有機(jī)相的，不過這個(gè)主要是起到影響分離效果的問題，看你的分離效果還是可以的，這個(gè)就不說了。3、三乙胺在這里的作用，主要是起到抑制化合物解離的作用。祝樓主課題順利。 |
4樓2014-05-14 16:29:54
5樓2014-05-14 17:42:05
raulsam1984
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樓主，增加有機(jī)相只不過是改變化合物的保留時(shí)間或者分離度，對(duì)你現(xiàn)在遇到的問題沒有太多的幫助。你現(xiàn)在是腺嘌呤峰的峰型不好，就是響應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng)，化合物解離了，這個(gè)主要與流動(dòng)相的pH值環(huán)境有關(guān)。你說四種物質(zhì)的pKa值不一樣，能否選擇一個(gè)折中的呢？或者你可以慢慢改變pH看看效果。而且我細(xì)心看了一下你的前三個(gè)峰，都存在拖尾的現(xiàn)象，調(diào)節(jié)一下pH值是有必要的。 |
6樓2014-05-15 09:06:01
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7樓2014-05-16 14:43:36
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