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小橋流水06金蟲 (小有名氣)
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[求助]
做高效液相色譜要注意哪些 已有4人參與
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做了快一個月的液相了，不知道為啥同一個樣品進(jìn)兩次樣有時峰面積差別好大，，做標(biāo)準(zhǔn)曲線時也是 今天偶爾和另一做標(biāo)準(zhǔn)曲線的同學(xué)交流，她說流動相每次最少要超聲15min,標(biāo)樣也要過膜，我表示每次超聲幾分鐘就拎起來了，標(biāo)樣更沒過膜 瞬間崩潰呀，做了這么久液相，白搭了？？  ~~~~(>_< ~~~~ 各位前輩液相經(jīng)驗(yàn)豐富的有啥經(jīng)驗(yàn)提點(diǎn)提點(diǎn)啊，跪求 |
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fayfeifei
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
nickxiaotong: 金幣+2, 感謝提供建議，歡迎常來環(huán)境版交流 2014-05-15 14:34:13
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nickxiaotong: 金幣+2, 感謝提供建議，歡迎常來環(huán)境版交流 2014-05-15 14:34:13
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關(guān)于流動相超聲，主要目的是為了脫氣，所以如果你的系統(tǒng)里沒有氣泡，這個問題排除。 關(guān)于樣品過膜，主要目的是為了保護(hù)進(jìn)樣口和色譜柱，以免不溶顆粒損傷機(jī)器。但基本上這個對你出峰面積沒有影響。 如果你的問題主要集中在同一樣品出現(xiàn)很大差別的峰面積的情況，你可以考慮以下幾點(diǎn)： 1 如果是手動進(jìn)樣，那樣確保自己的進(jìn)樣手法穩(wěn)定；如果是機(jī)器進(jìn)樣，那么要排查一下系統(tǒng)進(jìn)樣器是否有故障。 2 另一種可能是你的峰型不完美，或雜峰太多，導(dǎo)致機(jī)器自動積分有誤差。比如基線可能不平，有時候自動積分的時候把別的小峰也算進(jìn)去了。 3 也可能是流動相并不能完全將樣品峰洗脫下來，導(dǎo)致有時候出的多有時候出的少，結(jié)果不穩(wěn)定。 暫時想到這些可能，你可以一一排查。 |
4樓2014-05-15 09:14:36
woshilong12
新蟲 (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
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xuweimbf: 金幣+1, 積極應(yīng)助 2014-05-14 08:12:52
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xuweimbf: 金幣+1, 積極應(yīng)助 2014-05-14 08:12:52
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樣品肯定要過膜，這是為了防止堵塞色譜柱，另外流動相超生是為了出去流動相里面的空氣，如果是現(xiàn)在比較新的液相色譜的話，應(yīng)該不用超生就可以的，但是如果是以前比較舊的液相色譜建議還是超生15到20分鐘吧，你沒有超生那么長時間應(yīng)該問題也不大。同一個樣品進(jìn)兩次峰面積不同有可能是樣品是不是放置了一段時間，試著看一下平行樣的峰面積怎么樣；還有就是是不是時間太短了，有部分樣品沒有完全走出來，建議兩個樣品之間走一個空針試一下；最后還有可能就是儀器的問題了，因?yàn)槲覀兝蠋煆?qiáng)調(diào)最后懷疑儀器 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
2樓2014-05-13 23:18:19
xvzong
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3樓2014-05-14 10:30:12
ABCzero
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5樓2014-05-15 22:00:42
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