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wzysllm木蟲 (小有名氣)
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[求助]
CHO表達(dá)IgG全長抗體 已有2人參與
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使用CHO表達(dá)IgG全長抗體時(shí)候，分別PCR擴(kuò)增了輕鏈(可變區(qū)+恒定區(qū))和重鏈(可變區(qū)+恒定區(qū))，擬分別插入帶兩個(gè)啟動(dòng)子的表達(dá)載體中，再穩(wěn)轉(zhuǎn)CHO細(xì)胞。 想了解一下，IgG中輕鏈和重鏈間起連接作用的二硫鍵需要加么，加到輕鏈或者重鏈的哪一端比較好呢，謝謝！ |
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antibodyknow
銅蟲 (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wzysllm: 金幣+10, ★★★很有幫助, 非常感謝你的建議。 2014-05-16 08:31:46
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wzysllm: 金幣+10, ★★★很有幫助, 非常感謝你的建議。 2014-05-16 08:31:46
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如果你克隆的是完整的抗體輕鏈和重鏈基因，那么你就不用擔(dān)心二硫鍵的形成問題，因?yàn)榭贵w重輕鏈間的二硫鍵形成所需的cys已經(jīng)在抗體恒定區(qū)序列中了。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)的重輕鏈會自組裝形成鏈間二硫鍵和鏈內(nèi)二硫鍵。 但全抗體表達(dá)可不是你說的那么簡單。如果實(shí)驗(yàn)室沒有抗體研究的基礎(chǔ)，我建議你找一個(gè)比較專業(yè)的技術(shù)服務(wù)公司幫你做全抗體表達(dá)和純化。 以下為廣告：百特美博可以定制重組抗體，時(shí)間只需要3周，提供1-10mg蛋白，僅供參考 |
2樓2014-05-15 17:10:11
小周
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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3樓2014-05-16 08:30:03
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