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jasonwyb123金蟲 (小有名氣)
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[求助]
picogreen ds DNA實驗相關(guān)問題
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最近在用invitrogen公司的picogreen dsDNA 試劑盒檢測殘留DNA 一直出現(xiàn)問題,請相關(guān)大蝦幫忙解決一下: ①標(biāo)曲用2倍稀釋和10倍稀釋,做出標(biāo)曲r方很差,不能達(dá)到0.99,一般最開始兩個點差別最大 ②具體加picogreen 燃料時是如何加的?我現(xiàn)在是把所有標(biāo)準(zhǔn)品和樣品都100ul放好,之后用排槍一起加,之后避光顯色五分鐘左右(染色時間好像和信號響應(yīng)影響挺大,為何?) ③試劑盒7月份到期,現(xiàn)在用會出現(xiàn)問題嗎? ④樣品稀釋測殘DNA值不是很高,但用RNase處理1h后,發(fā)現(xiàn)幾乎有10倍量的降低,這說明我樣品里含有大量RNA?RNA在室溫條件下不是極不穩(wěn)定易降解吧,怎么可能還能測到?另外,該試劑盒不是不收rna或ssDNA的影響嗎? ⑤樣品中加入一些蛋白酶消化一下,發(fā)現(xiàn)殘DNA竟然增加,如何解釋! 謝謝大蝦幫助,如果完美解決問題,將會追加金幣! |
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