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jasonwyb123金蟲 (小有名氣)
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[求助]
picogreen ds DNA實(shí)驗(yàn)相關(guān)問題
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最近在用invitrogen公司的picogreen dsDNA 試劑盒檢測殘留DNA 一直出現(xiàn)問題，請(qǐng)相關(guān)大蝦幫忙解決一下： ①標(biāo)曲用2倍稀釋和10倍稀釋，做出標(biāo)曲r方很差，不能達(dá)到0.99，一般最開始兩個(gè)點(diǎn)差別最大 ②具體加picogreen 燃料時(shí)是如何加的？我現(xiàn)在是把所有標(biāo)準(zhǔn)品和樣品都100ul放好，之后用排槍一起加，之后避光顯色五分鐘左右（染色時(shí)間好像和信號(hào)響應(yīng)影響挺大，為何？） ③試劑盒7月份到期，現(xiàn)在用會(huì)出現(xiàn)問題嗎？ ④樣品稀釋測殘DNA值不是很高，但用RNase處理1h后，發(fā)現(xiàn)幾乎有10倍量的降低，這說明我樣品里含有大量RNA？RNA在室溫條件下不是極不穩(wěn)定易降解吧，怎么可能還能測到？另外，該試劑盒不是不收rna或ssDNA的影響嗎？ ⑤樣品中加入一些蛋白酶消化一下，發(fā)現(xiàn)殘DNA竟然增加，如何解釋！ 謝謝大蝦幫助，如果完美解決問題，將會(huì)追加金幣！ |
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