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小木蟲論壇-學術(shù)科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 動植物 » 實驗技術(shù) » 切片問題
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[求助]
切片問題 已有3人參與
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各位大俠，小女子這廂有禮了！ 切入主題！ 只知道某個腺體的具體位置，現(xiàn)在要做這個腺體的發(fā)育，我該如何切片，材料十分的小，發(fā)育成熟，肉眼也不能見，請問各位親，我該如何操作呀，感謝感謝！  |
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還是植物好
版主 (著名寫手)
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- 蟲號: 2092438
- 注冊: 2012-10-28
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物結(jié)構(gòu)學
- 管轄: 動植物
【答案】應助回帖
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1．取材 選取老嫩適中的葉片，將葉片經(jīng)中脈切成5mm×5mm大小的塊，選取合適的葉柄切取約5mm。 2．固定 將截取的葉片和葉柄放入FAA（甲醛：冰乙酸：乙醇（50%）按照 1：1：18 的比例配制）中固定，固定時間應不少于 48 小時。 3．脫水 用乙醇作為脫水劑，經(jīng)梯度濃度65%→75%→85%→95%→100%→100%逐級脫水，每個濃度梯度脫水2小時，100%乙醇時間減半，且分兩次進行，第一次35分鐘，第二次25分鐘。 4．透明 以二甲苯為透明劑，經(jīng) 2/3 無水乙醇+1/3 二甲苯→1/2 無水乙醇+1/2 二甲苯→1/3 無水乙醇+2/3 二甲苯→純二甲苯，不斷增加二甲苯的比例，逐級透明，每級透明時間為 1小時。為使透明效果更好，可以用純二甲苯透明兩次，每次 1 小時。 5．浸蠟 先用低熔點的切片石蠟（52℃-54℃）在 30℃下浸蠟 24 小時，然后用由蜂蠟（熔點58℃-60℃）和低熔點切片石蠟按 1：9 的質(zhì)量比融合在一起的混合石蠟在溫箱中 60℃保溫、浸蠟，每3小時換一次混合石蠟，重復進行兩次，共 6 小時。 6．包埋 材料浸蠟結(jié)束后馬上用鑷子轉(zhuǎn)移到裝有液態(tài)上述混合石蠟的小紙盒中，并迅速冷卻；使材料的軸性系統(tǒng)垂直于紙盒的底部，以便于蠟塊的切修，做材料橫切觀察其橫截面結(jié)構(gòu)。鑷子在使用前應先預熱，以免材料粘附在鑷子上損壞材料。 7．切片 根據(jù)材料在蠟塊中的位置和方向，將蠟塊修成梯形，然后粘到切片機的蠟臺上進行切片。本實驗采用旋轉(zhuǎn)式手搖切片機，切片厚度8－12微米。 8．展片及粘片 在潔凈的載玻片上均勻涂上少許蛋白甘油，將蠟帶放入45－53℃的水浴鍋中，待蠟帶展平后，用涂有蛋白甘油的載玻片將它撈起，使蠟帶光面緊貼載玻片，然后在 35℃溫箱中烘干，蠟帶就粘附在載玻片上了。 9．脫蠟和染色 二甲苯脫蠟后采用番紅固綠復染法染色。 10．封片及觀察 用中性樹膠封片后，將切片放入 35℃溫箱中烘干。數(shù)日后可進行觀察和光學顯微攝影。 |
3樓2014-06-09 16:45:04
多少刺猬
新蟲 (初入文壇)
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- 專業(yè): 植物學研究的新技術(shù)、新方
2樓2014-06-05 05:11:49
weiyuzhenchi
鐵蟲 (初入文壇)
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4樓2014-06-18 10:54:16
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