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切片問題 已有3人參與
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各位大俠,小女子這廂有禮了! 切入主題! 只知道某個(gè)腺體的具體位置,現(xiàn)在要做這個(gè)腺體的發(fā)育,我該如何切片,材料十分的小,發(fā)育成熟,肉眼也不能見,請(qǐng)問各位親,我該如何操作呀,感謝感謝! |
鐵蟲 (初入文壇)
新蟲 (初入文壇)
版主 (著名寫手)
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1.取材 選取老嫩適中的葉片,將葉片經(jīng)中脈切成5mm×5mm大小的塊,選取合適的葉柄切取約5mm。 2.固定 將截取的葉片和葉柄放入FAA(甲醛:冰乙酸:乙醇(50%)按照 1:1:18 的比例配制)中固定,固定時(shí)間應(yīng)不少于 48 小時(shí)。 3.脫水 用乙醇作為脫水劑,經(jīng)梯度濃度65%→75%→85%→95%→100%→100%逐級(jí)脫水,每個(gè)濃度梯度脫水2小時(shí),100%乙醇時(shí)間減半,且分兩次進(jìn)行,第一次35分鐘,第二次25分鐘。 4.透明 以二甲苯為透明劑,經(jīng) 2/3 無水乙醇+1/3 二甲苯→1/2 無水乙醇+1/2 二甲苯→1/3 無水乙醇+2/3 二甲苯→純二甲苯,不斷增加二甲苯的比例,逐級(jí)透明,每級(jí)透明時(shí)間為 1小時(shí)。為使透明效果更好,可以用純二甲苯透明兩次,每次 1 小時(shí)。 5.浸蠟 先用低熔點(diǎn)的切片石蠟(52℃-54℃)在 30℃下浸蠟 24 小時(shí),然后用由蜂蠟(熔點(diǎn)58℃-60℃)和低熔點(diǎn)切片石蠟按 1:9 的質(zhì)量比融合在一起的混合石蠟在溫箱中 60℃保溫、浸蠟,每3小時(shí)換一次混合石蠟,重復(fù)進(jìn)行兩次,共 6 小時(shí)。 6.包埋 材料浸蠟結(jié)束后馬上用鑷子轉(zhuǎn)移到裝有液態(tài)上述混合石蠟的小紙盒中,并迅速冷卻;使材料的軸性系統(tǒng)垂直于紙盒的底部,以便于蠟塊的切修,做材料橫切觀察其橫截面結(jié)構(gòu)。鑷子在使用前應(yīng)先預(yù)熱,以免材料粘附在鑷子上損壞材料。 7.切片 根據(jù)材料在蠟塊中的位置和方向,將蠟塊修成梯形,然后粘到切片機(jī)的蠟臺(tái)上進(jìn)行切片。本實(shí)驗(yàn)采用旋轉(zhuǎn)式手搖切片機(jī),切片厚度8-12微米。 8.展片及粘片 在潔凈的載玻片上均勻涂上少許蛋白甘油,將蠟帶放入45-53℃的水浴鍋中,待蠟帶展平后,用涂有蛋白甘油的載玻片將它撈起,使蠟帶光面緊貼載玻片,然后在 35℃溫箱中烘干,蠟帶就粘附在載玻片上了。 9.脫蠟和染色 二甲苯脫蠟后采用番紅固綠復(fù)染法染色。 10.封片及觀察 用中性樹膠封片后,將切片放入 35℃溫箱中烘干。數(shù)日后可進(jìn)行觀察和光學(xué)顯微攝影。 |

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