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[求助]
脫鹽純化 已有6人參與
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大俠們好： 我目前要做一個(gè)實(shí)驗(yàn)，反應(yīng)步驟是這樣的：第一步反應(yīng)結(jié)束后，用PBS過(guò)G-25脫鹽，進(jìn)行純化。但是現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有AKTA純化設(shè)備，我要怎么操作呀，有沒(méi)有有經(jīng)驗(yàn)的大俠，提供一些參考。 謝謝大家！ |
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2樓2014-06-09 11:15:56
逍瀟
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3樓2014-06-09 12:16:23
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4樓2014-06-09 17:48:38
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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脫鹽純化，其實(shí)很簡(jiǎn)單的，不一定要用到分子篩，可以考慮一下超濾，或者更簡(jiǎn)單的透析。 超濾的話，要有一臺(tái)低溫高速離心機(jī)（可以2-8℃離心10000rpm以上），然后挑選合適孔徑帶濾膜的離心管就，超濾5-6次就可以了，濾膜的孔徑根據(jù)你蛋白的分子量大小來(lái)決定； 透析的話，需要的設(shè)備就更簡(jiǎn)單了，燒杯、攪拌設(shè)備，把蛋白裝進(jìn)透析袋里，扎緊之后，用PBS來(lái)攪拌透析，大概1小時(shí)換一次PBS，換幾次就可以了，如果蛋白在室溫不太穩(wěn)定的話，還可以放到冰箱里去透析。透析袋孔徑的大小，同樣根據(jù)你蛋白的分子量大小來(lái)決定。 |
5樓2014-06-09 17:51:05
6樓2014-06-09 21:12:44
7樓2014-06-09 21:13:27
【答案】應(yīng)助回帖
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超濾也可以做到的。 帶濾膜的離心管，在離心的過(guò)程中，蛋白分子會(huì)被截留下來(lái)，小分子雜質(zhì)和液體會(huì)被帶走，然后再加入你需要的緩沖液，繼續(xù)離心5-6次，這時(shí)候蛋白所處的緩沖體系就是你后面加入的緩沖液，這樣就更換了Buffer啦，如果你還要換別的Buffer，那就繼續(xù)離心了。 我在工作中，經(jīng)常會(huì)需要對(duì)蛋白進(jìn)行標(biāo)記，都是用超濾的方法來(lái)處理蛋白分子的，目的就是：1、脫鹽純化，去掉蛋白溶液里的各種防腐劑、鹽類；2、更換緩沖液，讓蛋白在合適的pH體系里跟我的標(biāo)記物進(jìn)行反應(yīng)。 |
8樓2014-06-10 22:04:08
爨鄉(xiāng)主人
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9樓2014-06-11 19:46:32
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10樓2014-06-11 21:15:14
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