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miranda2013鐵蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
DNA熔點(diǎn)測(cè)試實(shí)驗(yàn) 已有3人參與
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各位蟲(chóng)友： 看到藥物與DNA相互作用的文獻(xiàn)中有測(cè)DNA熔點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)， 1、請(qǐng)問(wèn)DNA熔點(diǎn)測(cè)試實(shí)驗(yàn)該怎么做，才能像文獻(xiàn)中那樣做的數(shù)據(jù)結(jié)果很漂亮（如下圖）。我自己想到的方法是將DNA溶液一直加熱，每隔一定溫度取液測(cè)量紫外吸收。但是這樣做出的結(jié)果很不好。 1、請(qǐng)問(wèn)DNA熔點(diǎn)測(cè)試實(shí)驗(yàn)，是有專門(mén)的儀器測(cè)量嗎？?jī)x器叫什么名稱？ 圖片1.png |
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hy519772062
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miranda2013: 金幣+5 2014-06-13 13:16:04
| 其實(shí)紫外可見(jiàn)分光光譜儀和圓二色光譜儀都可以測(cè)熔點(diǎn)的，儀器上連個(gè)溫控的裝置，緩慢升溫，每隔1~2℃采集一次光譜就行。文獻(xiàn)中也有用FRET的方法，不過(guò)這個(gè)就相對(duì)麻煩一下，要用兩端連著熒光基團(tuán)的DNA。 |
3樓2014-06-13 09:06:30
miranda2013
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5樓2014-06-13 14:16:04
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西門(mén)吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-06-13 19:25:40
西門(mén)吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-06-13 19:25:40
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用圓二色測(cè)的話應(yīng)該只需設(shè)置起始波長(zhǎng)范圍和溫度范圍，還有要監(jiān)測(cè)的DNA的特征峰，然后設(shè)好每隔幾度采集一次光譜，最后就會(huì)出來(lái)一條溶解曲線，其實(shí)就是那個(gè)特征峰的強(qiáng)度隨溫度變化的曲線 |
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miranda20136樓2014-06-13 18:12:25
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7樓2014-06-13 19:15:22
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8樓2014-06-13 19:17:20
Academician
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| 前輩好，我最近在做用紫外測(cè)定ctDNA的Tm實(shí)驗(yàn)，以測(cè)定小分子和DNA的相互作用方式及結(jié)合力強(qiáng)弱。但之前沒(méi)有做過(guò)，只看了一些文獻(xiàn)，這個(gè)實(shí)驗(yàn)是要升溫的（50-98度），紫外有溫度探頭伸到比色皿內(nèi)部，請(qǐng)問(wèn)是不是要用特定的比色皿，這樣的話才不會(huì)在加熱升溫過(guò)程中有溶劑揮發(fā)（我用的溶劑是10mMPBS的水溶液），我現(xiàn)在用的是安捷倫的Cary 3500紫外分光光度計(jì)，比色皿部件號(hào)是5062-2496），相關(guān)鏈接https://www.agilent.com/zh-cn/pr ... -uv-vis-nir-systems？請(qǐng)問(wèn)這種比色皿是否可以直接用來(lái)測(cè)Tm，還是說(shuō)要專用的比色皿，非常感謝 |
9樓2021-04-27 22:18:49
Academician
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| 前輩好，我最近在做用紫外測(cè)定ctDNA的Tm實(shí)驗(yàn)，以測(cè)定小分子和DNA的相互作用方式及結(jié)合力強(qiáng)弱。但之前沒(méi)有做過(guò)，只看了一些文獻(xiàn)，這個(gè)實(shí)驗(yàn)是要升溫的（50-98度），紫外有溫度探頭伸到比色皿內(nèi)部，請(qǐng)問(wèn)是不是要用特定的比色皿，這樣的話才不會(huì)在加熱升溫過(guò)程中有溶劑揮發(fā)（我用的溶劑是10mMPBS的水溶液），我現(xiàn)在用的是安捷倫的Cary 3500紫外分光光度計(jì)，比色皿部件號(hào)是5062-2496），相關(guān)鏈接https://www.agilent.com/zh-cn/pr ... -uv-vis-nir-systems？請(qǐng)問(wèn)這種比色皿是否可以直接用來(lái)測(cè)Tm，還是說(shuō)要專用的比色皿，非常感謝 |
10樓2021-04-27 22:19:03
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