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跪求大家來看我的融合細胞。我已經(jīng)無能為力了 已有3人參與
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我做的是單抗，骨髓瘤sp2/0細胞與小鼠脾細胞融合后，3天后的照片，rpmi培養(yǎng)基＋HAT＋類胎牛血清（胎牛血清沒貨了），上面感覺漂浮著一些絮狀物，又像是污染，我現(xiàn)在不知道要咋辦了，已經(jīng)好幾次了！     這些都是同一張圖片在不同倍數(shù)顯微鏡下的圖片。跪求大神指點，萬分感謝�。。。� 2014-06-11 100514.jpg 2014-06-11 100517.jpg 2014-06-11 100522.jpg 2014-06-11 100628.jpg 2014-06-11 100630.jpg |
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4樓2014-06-11 16:26:57
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我看不清楚細胞，有些臟東西很正常，我做雜交瘤的時候也這樣，主要是一些脾臟碾磨下的一些小碎渣之類的，你培養(yǎng)一段時間看看，如果增多直接丟棄或者這個污染的孔加NaOH處理。 細菌污染不是這樣子，是一些小小的黑色點點以比較快的速度在培養(yǎng)基里打轉或者到處跑，你的不像。要算污染可能是霉菌，如果污染霉菌，整個培養(yǎng)基會非常渾濁，培養(yǎng)基里面看到絮狀的東西，霉菌的話有菌絲，污染直接全部丟棄，否則整個培養(yǎng)箱全毀，因為有孢子飄。但是我感覺你的沒問題，你的黑色的東西大，感覺是“實”的，應該是一些實質(zhì)的組織之類的。當然存在一些你忽略的真正的細菌或者霉菌也難說。 至于支原體污染，這個實在沒辦法，我的sp2/0復蘇之后肯定要過老鼠腹腔，至少一遍，過兩三次之后會清除支原體，然后取出來再培養(yǎng)，狀態(tài)會非常好，非常適合做融合。融合時最好加雙抗，血清要好的最好了，但是也影響不大，我們用的是小牛血清（融合培養(yǎng)是20%），融合細胞需要滋養(yǎng)細胞。 |
10樓2014-06-11 21:54:29
逍瀟
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2樓2014-06-11 12:36:07
yipan 
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【答案】應助回帖
商家已經(jīng)主動聲明此回帖可能含有宣傳內(nèi)容
感謝參與，應助指數(shù) +1
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血清中加入支原體清除試劑，可以殺滅支原體污染，同時還具有廣譜抗菌作用。不同于抗生素，對細胞沒有任何毒害和依賴性，因為試劑本身為多肽，可以降解�？梢栽囈幌�。 支原體是一種大小僅為0.2~0.3 μm，無細胞壁，可透過一般過濾膜（0.22-0.45 μm）的原核生物，在細胞培養(yǎng)過程中，支原體感染發(fā)生率達到63%，因而細胞培養(yǎng)過程中被支原體污染是一個世界性的難題。多篇文獻研究表明：當細胞（特別是傳代細胞）被支原體污染后，細胞內(nèi)的DNA、RNA及蛋白表達發(fā)生改變，而細胞的生長率一般并未發(fā)生顯著的影響，因而細胞被支原體污染一般難以察覺。 吉銳生物根據(jù)自身的經(jīng)驗開發(fā)了MycoplasmaOUT™，用于解決因支原體污染而導致細胞污染或狀態(tài)下降的問題，同時其對于見的革蘭氏陰性和陽性菌也有一定的清除作用。從而確保研究人員的研究結果真實、可信。 MycoplasmaOUTTM Treatment 1、 推薦稀釋比例為1:1000，比如：10ul的Treatment加入到10ml的培養(yǎng)基中。 2、 棄去舊的培養(yǎng)基，用PBS將細胞清洗干凈，再加入新鮮的含有Treatment的培養(yǎng)基，1天1次，連續(xù)處理3天。這一點非常重要，因為Treatment在培養(yǎng)基中會被緩慢降解。另外，也可以2天1次，連續(xù)處理5-6天。 3、 如果發(fā)現(xiàn)細胞對Treatment非常敏感，或者很明顯的抑制細胞生長，建議1:2000稀釋，1天1次，連續(xù)處理6天。如果細胞污染嚴重，推薦再適當延長處理時間。 4、 用Treatment處理時，建議保持細胞的密度在50-60%之間。 5、 處理完畢后，加入新鮮的培養(yǎng)基，或者MycoplasmaOUTTM Prevention預防支原體再次污染。 MycoplasmaOUT™ Prevention 1、 推薦稀釋比例為1:1000，比如：10ul的Prevention加入到10ml的培養(yǎng)基中，用于預防支原體污染。 2、 建議根據(jù)細胞的周期不一樣，每2-4天處理1次，長期處理，以預防支原體污染。 |
3樓2014-06-11 13:20:45
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7樓2014-06-11 20:25:57
逍瀟
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