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跪求大家來(lái)看我的融合細(xì)胞。我已經(jīng)無(wú)能為力了 已有3人參與
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我做的是單抗，骨髓瘤sp2/0細(xì)胞與小鼠脾細(xì)胞融合后，3天后的照片，rpmi培養(yǎng)基＋HAT＋類(lèi)胎牛血清（胎牛血清沒(méi)貨了），上面感覺(jué)漂浮著一些絮狀物，又像是污染，我現(xiàn)在不知道要咋辦了，已經(jīng)好幾次了！     這些都是同一張圖片在不同倍數(shù)顯微鏡下的圖片。跪求大神指點(diǎn)，萬(wàn)分感謝�。。。� 2014-06-11 100514.jpg 2014-06-11 100517.jpg 2014-06-11 100522.jpg 2014-06-11 100628.jpg 2014-06-11 100630.jpg |
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4樓2014-06-11 16:26:57
生物小通
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我看不清楚細(xì)胞，有些臟東西很正常，我做雜交瘤的時(shí)候也這樣，主要是一些脾臟碾磨下的一些小碎渣之類(lèi)的，你培養(yǎng)一段時(shí)間看看，如果增多直接丟棄或者這個(gè)污染的孔加NaOH處理。 細(xì)菌污染不是這樣子，是一些小小的黑色點(diǎn)點(diǎn)以比較快的速度在培養(yǎng)基里打轉(zhuǎn)或者到處跑，你的不像。要算污染可能是霉菌，如果污染霉菌，整個(gè)培養(yǎng)基會(huì)非常渾濁，培養(yǎng)基里面看到絮狀的東西，霉菌的話有菌絲，污染直接全部丟棄，否則整個(gè)培養(yǎng)箱全毀，因?yàn)橛墟咦语h。但是我感覺(jué)你的沒(méi)問(wèn)題，你的黑色的東西大，感覺(jué)是“實(shí)”的，應(yīng)該是一些實(shí)質(zhì)的組織之類(lèi)的。當(dāng)然存在一些你忽略的真正的細(xì)菌或者霉菌也難說(shuō)。 至于支原體污染，這個(gè)實(shí)在沒(méi)辦法，我的sp2/0復(fù)蘇之后肯定要過(guò)老鼠腹腔，至少一遍，過(guò)兩三次之后會(huì)清除支原體，然后取出來(lái)再培養(yǎng)，狀態(tài)會(huì)非常好，非常適合做融合。融合時(shí)最好加雙抗，血清要好的最好了，但是也影響不大，我們用的是小牛血清（融合培養(yǎng)是20%），融合細(xì)胞需要滋養(yǎng)細(xì)胞。 |
10樓2014-06-11 21:54:29
逍瀟
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2樓2014-06-11 12:36:07
yipan 
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【答案】應(yīng)助回帖
商家已經(jīng)主動(dòng)聲明此回帖可能含有宣傳內(nèi)容
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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血清中加入支原體清除試劑，可以殺滅支原體污染，同時(shí)還具有廣譜抗菌作用。不同于抗生素，對(duì)細(xì)胞沒(méi)有任何毒害和依賴(lài)性，因?yàn)樵噭┍旧頌槎嚯模梢越到��？梢栽囈幌隆?br />
支原體是一種大小僅為0.2~0.3 μm，無(wú)細(xì)胞壁，可透過(guò)一般過(guò)濾膜（0.22-0.45 μm）的原核生物，在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，支原體感染發(fā)生率達(dá)到63%，因而細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中被支原體污染是一個(gè)世界性的難題。多篇文獻(xiàn)研究表明：當(dāng)細(xì)胞（特別是傳代細(xì)胞）被支原體污染后，細(xì)胞內(nèi)的DNA、RNA及蛋白表達(dá)發(fā)生改變，而細(xì)胞的生長(zhǎng)率一般并未發(fā)生顯著的影響，因而細(xì)胞被支原體污染一般難以察覺(jué)。 吉銳生物根據(jù)自身的經(jīng)驗(yàn)開(kāi)發(fā)了MycoplasmaOUT™，用于解決因支原體污染而導(dǎo)致細(xì)胞污染或狀態(tài)下降的問(wèn)題，同時(shí)其對(duì)于見(jiàn)的革蘭氏陰性和陽(yáng)性菌也有一定的清除作用。從而確保研究人員的研究結(jié)果真實(shí)、可信。 MycoplasmaOUTTM Treatment 1、 推薦稀釋比例為1:1000，比如：10ul的Treatment加入到10ml的培養(yǎng)基中。 2、 棄去舊的培養(yǎng)基，用PBS將細(xì)胞清洗干凈，再加入新鮮的含有Treatment的培養(yǎng)基，1天1次，連續(xù)處理3天。這一點(diǎn)非常重要，因?yàn)門(mén)reatment在培養(yǎng)基中會(huì)被緩慢降解。另外，也可以2天1次，連續(xù)處理5-6天。 3、 如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞對(duì)Treatment非常敏感，或者很明顯的抑制細(xì)胞生長(zhǎng)，建議1:2000稀釋?zhuān)?天1次，連續(xù)處理6天。如果細(xì)胞污染嚴(yán)重，推薦再適當(dāng)延長(zhǎng)處理時(shí)間。 4、 用Treatment處理時(shí)，建議保持細(xì)胞的密度在50-60%之間。 5、 處理完畢后，加入新鮮的培養(yǎng)基，或者M(jìn)ycoplasmaOUTTM Prevention預(yù)防支原體再次污染。 MycoplasmaOUT™ Prevention 1、 推薦稀釋比例為1:1000，比如：10ul的Prevention加入到10ml的培養(yǎng)基中，用于預(yù)防支原體污染。 2、 建議根據(jù)細(xì)胞的周期不一樣，每2-4天處理1次，長(zhǎng)期處理，以預(yù)防支原體污染。 |
3樓2014-06-11 13:20:45
5樓2014-06-11 20:10:13
6樓2014-06-11 20:25:44
7樓2014-06-11 20:25:57
逍瀟
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8樓2014-06-11 20:56:10
9樓2014-06-11 21:37:01
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