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[求助] 請(qǐng)問在提RNA的時(shí)候，用氯仿：異戊醇=24:1，還是用氯仿？已有4人參與

請(qǐng)問各位高手，在提取RNA的時(shí)候，是可以使用氯仿：異戊醇=24:1，還是可以使用氯仿？
二者有什么區(qū)別呢？加氯仿的那一步，可以劇烈震蕩嗎？有人說劇烈震蕩回造成DNA污染？
現(xiàn)在室溫有點(diǎn)高，操作在冰上進(jìn)行？

請(qǐng)各位高手指點(diǎn)一二

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1樓 2014-06-11 18:28:45

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Neo2000

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kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2014-06-12 13:00:33

我從來不用異戊醇，那玩意味道太重太難聞，也沒必要加的，至于后面那個(gè)問題，純屬個(gè)人見解，沒參考意義。

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2樓2014-06-11 18:37:41

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wangyue115

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kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2014-06-12 13:00:36

異戊醇的作用是調(diào)整極性，使氯仿更高效的萃取酚等有機(jī)物以及令蛋白質(zhì)變性。
關(guān)于振蕩的問題：如果你采用的是TRIzol一步法，劇烈振蕩的確有可能使部分DNA碎片進(jìn)入水相。如果是分步除雜，問題不大。
低溫操作主要是為了降低RNA酶的活性，為了RNA的完整性，盡量低溫操作。

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3樓2014-06-12 00:10:23

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匿名

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4樓2014-06-12 09:58:26

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夏至1990

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眼淚笑了23(西門吹雪170代發(fā)): 金幣+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-08-06 09:23:23

苯酚，氯仿，異戊醇。25:24:1是劇烈震蕩，提的RNA還好啊，提RNA 沒有專用的RNA臺(tái)子嗎，提RNA最怕污染，RNA酶到處都是啊，再說房間有空調(diào)啊，

樓主加油啊

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Sodoyouwanttotakealeapoffaith…orbecomeanoldman,filledwithregret…waitingtodiealone?

5樓2014-06-12 17:25:08

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引用回帖:

5樓: Originally posted by 夏至1990 at 2014-06-12 17:25:08
苯酚，氯仿，異戊醇。25:24:1是劇烈震蕩，提的RNA還好啊，提RNA 沒有專用的RNA臺(tái)子嗎，提RNA最怕污染，RNA酶到處都是啊，再說房間有空調(diào)啊，

樓主加油啊

在剛開始提取的時(shí)候是加氯仿，最后進(jìn)行消化的時(shí)候是加上面的苯酚，氯仿，異戊醇，說錯(cuò)了，難道提取的方法不大一樣，樓主提取什么的RNA

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6樓2014-06-12 17:27:19

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yzq6098273

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你好，TRIzol法提RNA是加酚：氯仿：異戊醇=25：24：1（ph<5.0）好呢？還是氯仿：異戊醇=24：1，PH有要求嗎？

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天外飛仙

7樓2014-08-05 14:58:10

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yzq6098273

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引用回帖:

3樓: Originally posted by wangyue115 at 2014-06-12 00:10:23
異戊醇的作用是調(diào)整極性，使氯仿更高效的萃取酚等有機(jī)物以及令蛋白質(zhì)變性。
關(guān)于振蕩的問題：如果你采用的是TRIzol一步法，劇烈振蕩的確有可能使部分DNA碎片進(jìn)入水相。如果是分步除雜，問題不大。
低溫操作主要是 ...

你好，TRIzol法提RNA是加酚：氯仿：異戊醇=25：24：1（ph<5.0）好呢？還是氯仿：異戊醇=24：1，PH有要求嗎？非常感謝。

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天外飛仙

8樓2014-08-05 15:00:43

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8樓: Originally posted by yzq6098273 at 2014-08-05 15:00:43
你好，TRIzol法提RNA是加酚：氯仿：異戊醇=25：24：1（ph<5.0）好呢？還是氯仿：異戊醇=24：1，PH有要求嗎？非常感謝。...

TRIzol法中，TRIzol中已經(jīng)含有酚了，因此不必再加酚，用純氯仿就可以了，PH也不用調(diào)整。

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9樓2014-08-06 00:23:51

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