 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3174 | 回復(fù): 7 | ||
austin2008鐵桿木蟲 (著名寫手)
|
[求助]
能在芽孢桿菌中復(fù)制的溫敏型復(fù)制子194ts片段連接T載體多次測(cè)序都發(fā)生突變 已有1人參與
|
|
問題描述：本人想構(gòu)建一個(gè)溫敏型的穿梭質(zhì)粒，在NCBI上找到pE194質(zhì)粒上的復(fù)制子序列194ts（GenBank: M17811.1），然后送到蘇州某公司合成1138 bp 的片段，結(jié)果該公司兩次裝載pUC57載體失敗，主要是原因是，這個(gè)片段裝到pUC57載體中總是發(fā)生各種突變，他們測(cè)序了7個(gè)克隆子后測(cè)序發(fā)現(xiàn)2個(gè)雙峰，5個(gè)突變，而且每個(gè)突變的突變位置都不一樣，最終提供給我們的是合成的組裝好的PCR產(chǎn)物和空的pUC57載體，給我們的解釋是我們合成的194ts片段是個(gè)復(fù)制子可能會(huì)與載體上大腸桿菌的ori發(fā)生沖突，復(fù)制過程中產(chǎn)生突變。我當(dāng)時(shí)對(duì)這個(gè)解釋是將信將疑，等拿到材料了準(zhǔn)備驗(yàn)證一下，無論是我們連接pMD19T simple載體還是pUC57載體，做了3次，每次送3-4個(gè)陽性克隆子去測(cè)序，結(jié)果每次都有突變，而且每次突變的點(diǎn)不一樣，我們將這些突變的溫敏復(fù)制子酶切后，連入穿梭載體替換芽孢桿菌的復(fù)制區(qū)域，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化2次枯草芽孢桿菌，每一種都沒有長出陽性克隆子（注：對(duì)照質(zhì)粒轉(zhuǎn)化長了，枯草芽孢桿菌感受態(tài)細(xì)胞沒問題）。 我個(gè)人分析了一下，可能有以下2種原因：（1）這個(gè)溫敏型復(fù)制子194ts連入T載體質(zhì)粒不穩(wěn)定，可能是連入的方向不好；（2）大腸桿菌的ori和這個(gè)194ts片段在一個(gè)載體中時(shí)在質(zhì)粒復(fù)制過程中出現(xiàn)問題；問了好些做分子生物學(xué)的人都不知道其中出了什么問題，請(qǐng)了解情況的高手賜教，不勝感激……！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有69人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 工程菌在疾病治療領(lǐng)域的發(fā)展
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 世界衛(wèi)生組織對(duì)轉(zhuǎn)基因的解讀
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 2010中科院微生物考博真題答案
已經(jīng)有39人回復(fù)
- 求芽孢桿菌穿梭質(zhì)粒以及基因敲除經(jīng)驗(yàn)
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 革蘭氏陽性菌接合 出問題了
已經(jīng)有4人回復(fù)
- pe194質(zhì)粒中溫敏復(fù)制子的克隆與基因敲除用穿梭質(zhì)粒的構(gòu)建問題
已經(jīng)有1人回復(fù)
- 大腸和枯草中的質(zhì)粒的不同
已經(jīng)有11人回復(fù)
- 適于在枯草芽孢桿菌中復(fù)制的溫敏型質(zhì)粒
已經(jīng)有0人回復(fù)
- 【求助/交流】pIC333質(zhì)粒能在巨大芽孢桿菌里面自主復(fù)制嗎？
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【前沿】火星探索可使其表面遭到地球微生物污染
已經(jīng)有1人回復(fù)
huangrui1988 
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 73 (初中生)
- 金幣: 1727.8
- 散金: 20
- 紅花: 2
- 帖子: 201
- 在線: 210.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 953497
- 注冊(cè): 2010-02-07
- 專業(yè): 微生物資源與分類學(xué)
2樓2014-06-12 22:48:51
austin2008
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 22 (小學(xué)生)
- 金幣: 5184.4
- 散金: 100
- 紅花: 2
- 帖子: 1812
- 在線: 259.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 368365
- 注冊(cè): 2007-05-11
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
3樓2014-06-12 23:42:48
huangrui1988
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 73 (初中生)
- 金幣: 1727.8
- 散金: 20
- 紅花: 2
- 帖子: 201
- 在線: 210.1小時(shí)
- 蟲號(hào): 953497
- 注冊(cè): 2010-02-07
- 專業(yè): 微生物資源與分類學(xué)
4樓2014-06-13 00:02:40
weishengsu5
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 2526
- 紅花: 1
- 帖子: 469
- 在線: 374.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 1016558
- 注冊(cè): 2010-05-12
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化工與食品化工
5樓2015-01-08 17:06:42
austin2008
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 22 (小學(xué)生)
- 金幣: 5184.4
- 散金: 100
- 紅花: 2
- 帖子: 1812
- 在線: 259.5小時(shí)
- 蟲號(hào): 368365
- 注冊(cè): 2007-05-11
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
6樓2015-01-08 22:35:27
康二郎
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 21.3
- 散金: 40
- 帖子: 45
- 在線: 123.6小時(shí)
- 蟲號(hào): 2725538
- 注冊(cè): 2013-10-15
- 專業(yè): 食品科學(xué)基礎(chǔ)
7樓2015-03-31 13:55:59
weishengsu5
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 2526
- 紅花: 1
- 帖子: 469
- 在線: 374.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 1016558
- 注冊(cè): 2010-05-12
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化工與食品化工
8樓2018-04-20 15:16:57
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 austin2008 的主題更新
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料與化工一志愿南昌大學(xué)327求調(diào)劑推薦 +8 | Ncdx123456 2026-03-13 | 9/450 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 材料專碩306英一數(shù)二 +10 | z1z2z3879 2026-03-16 | 13/650 |
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +9 | yy要上岸呀 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考博] 26博士申請(qǐng) +3 | 1042136743 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 考研求調(diào)劑 +3 | 橘頌. 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +5 | 上岸的小葡 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 考研化學(xué)學(xué)碩調(diào)劑，一志愿985 +4 | 張vvvv 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自動(dòng)化所實(shí)習(xí) +6 | Losir 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +4 | 小賈同學(xué)123 2026-03-15 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +3 | 淇ya_~ 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 曼殊2266 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 070303 總分349求調(diào)劑 +3 | LJY9966 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 277材料科學(xué)與工程080500求調(diào)劑 +3 | 自由煎餅果子 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
 機(jī)械專碩調(diào)劑
+3
|
笨笨兔子 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +4 | 學(xué)員97LZgn 2026-03-13 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑一志愿 985 總分 295 +8 | dream…… 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +7 | 7712b 2026-03-13 | 7/350 |
|
|
|
[碩博家園] 085600 260分求調(diào)劑 +3 | 天空還下雨么 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料專碩350 求調(diào)劑 +4 | 王金科 2026-03-12 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 土木第一志愿276求調(diào)劑，科研和技能十分豐富，求新興方向的導(dǎo)師收留 +3 | 土木小天才 2026-03-12 | 3/150 |
|