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請教一下用WST-1做細胞毒性測試一些問題
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剛開始做細胞，向各位大神請教一些問題。 選擇用WST-1試劑盒測細胞毒性，現在實驗有的WST-1，規(guī)格是500T，為溶液。 第一個問題：500T是什么單位？ 細胞為MCF-7，96孔板鋪板，打算 5000cells/孔，每孔0.2mL培養(yǎng)基，給藥后打算24、48、72h后加入WST-1，第二個問題：那么需要WST-1多少毫升？ 文獻中有講初次實驗時可以在0.5、1、2和4小時后分別用酶標儀檢測，第三個問題，那么檢測中不會引入細菌嗎，有沒有影響？ 同時附上看到“WST-1細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒”的說明書，但和實驗室現有WST-1試劑盒不太一樣。多謝！ WST-1細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒 使用說明：使用說明： 1. WST-1溶液的配制：把1毫升電子耦合試劑加入到WST-1粉末中，完全溶解即成WST-1溶液。WST-1溶液4℃避光可保存一 周，而不影響使用效果。短期內不使用的WST-1溶液，分裝后可以-20℃避光保存半年(盡量避免反復凍融)。凍存的WST-1 溶液溶解后可能會觀察到一些沉淀物，這是正常現象，37℃水浴孵育2-10分鐘，通�？梢酝耆芙狻� 2. 通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000個細胞(具體每孔所用的細胞的數 目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等因素決定)。按照實驗需要，進行培養(yǎng)并給予0-10微升特定的藥物刺激。 3. 每孔加入10微升WST-1溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200微升，則需加入20微升WST-1溶液，其它情況以此類推。可以用 加了相應量細胞培養(yǎng)液和WST-1溶液但沒有加入細胞的孔作為空白對照。 4. 在細胞培養(yǎng)箱內繼續(xù)孵育0.5-4小時，對于大多數情況，孵育1-2小時就可以了。時間長短根據細胞的類型和細胞的密度等 實驗情況而定，初次實驗時可以在0.5、1、2和4小時后分別用酶標儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用 于后續(xù)實驗。圖3為HT-1080細胞在不同時間測定的細胞數量曲線。 |
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2014-06-16 17:02:03, 194.03 K
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