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分子克隆 （特別是平末端連接）新方法��！ 已有1人參與
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我們對(duì)經(jīng)典基因克隆方法進(jìn)行了小改進(jìn)， 有效果， 特別是對(duì)一些有挑戰(zhàn)性的克隆， 如平末端連接，單酶切產(chǎn)物連接，和某些雙酶切連接，有用： Gao S, Li Y, Zhang J, Chen H, Ren D, Zhang L, An Y. A modified version of the digestion-ligation cloning method for more efficient molecular cloning. Anal Biochem. 2014 453: 55-57. 以下是論文的鏈接： http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24613256 由于時(shí)間和實(shí)驗(yàn)條件有限，水平也有限， 做得不是很好， 也不系統(tǒng)。從我們?yōu)閿?shù)不多的經(jīng)驗(yàn)來(lái)看， 有的時(shí)候，它對(duì)平末端的連接效率比粘性末端高，這個(gè)很奇怪，我們也不知道為什么。 很簡(jiǎn)單方便，如果你能用經(jīng)典克隆方法順利克隆那當(dāng)然好， 如果用經(jīng)典方法不順利時(shí)，倒是可以一試，希望能有幫助。 需要注意的是： 1. 初始連接的體系應(yīng)該大點(diǎn)， 100-200ul 2. 膠回收的DNA的濃度會(huì)很低，但是沒(méi)有關(guān)系，因?yàn)楸静绞欠肿觾?nèi)自連， 本來(lái)就要求DNA的濃度低。 本方法用了兩步連接反應(yīng)。 實(shí)際上傳統(tǒng)連接方法之所以有時(shí)候效率低，是因?yàn)橐笠徊竭B接就要同時(shí)兩端都得連上，有時(shí)候很不容易， 而我們的方法，則是把一步有挑戰(zhàn)性的雙連接 變成了兩步?jīng)]有挑戰(zhàn)的單連接。 這種方式 ，對(duì)于平末端連接顯得更有意義。 大家想想， 一次連接就要求把兩個(gè)平末端同時(shí)都連上， 那得多難啊。 |
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2014-07-14 16:47:31, 578.51 K
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2樓2014-07-09 10:42:54
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