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雙酶切總是切不開。。。有沒有人用過NEB的NotI這個酶? 已有10人參與
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各位同學 我這兩個禮拜一只在用NOtI和sfiI這兩個酶雙酶切載體,但是一直都切不太出來。為了找出是哪個酶的問題,我是這樣做的: 在一號管中加入酶切體系和NOTI酶,37度7個小時,電泳檢測,發(fā)現酶切后的帶和未酶切的帶大小相同。說明酶切不成功。 在二號管中加入酶切體系和sfiI酶,50度過夜。電泳檢測,酶切后的帶比未酶切的帶遷移的慢,說明已經成功切開了。 切片段的時候,是在以上同樣的條件下(notI酶37度7個小時,再加sfiI酶50度過夜),電泳檢測是正確的。 注:這兩個酶用的都是NEB的,所用的buffer是一樣的,都是一個叫cutsmart的buffer。說明書上寫的是notI酶37度酶切15-20分鐘,sfiI酶50度酶切15-20分鐘。 各位高手知不知道這是怎么回事啊 急求幫助啊 這個NOTI賊貴賊貴的,用不起了。。。。。。。。。。! |
木蟲 (著名寫手)

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