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seven拂曉新蟲 (初入文壇)
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[求助]
雙酶切總是切不開(kāi)。。。有沒(méi)有人用過(guò)NEB的NotI這個(gè)酶？ 已有10人參與
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各位同學(xué) 我這兩個(gè)禮拜一只在用NOtI和sfiI這兩個(gè)酶雙酶切載體，但是一直都切不太出來(lái)。為了找出是哪個(gè)酶的問(wèn)題，我是這樣做的： 在一號(hào)管中加入酶切體系和NOTI酶，37度7個(gè)小時(shí)，電泳檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)酶切后的帶和未酶切的帶大小相同。說(shuō)明酶切不成功。 在二號(hào)管中加入酶切體系和sfiI酶，50度過(guò)夜。電泳檢測(cè)，酶切后的帶比未酶切的帶遷移的慢，說(shuō)明已經(jīng)成功切開(kāi)了。 切片段的時(shí)候，是在以上同樣的條件下（notI酶37度7個(gè)小時(shí)，再加sfiI酶50度過(guò)夜），電泳檢測(cè)是正確的。 注：這兩個(gè)酶用的都是NEB的，所用的buffer是一樣的，都是一個(gè)叫cutsmart的buffer。說(shuō)明書上寫的是notI酶37度酶切15-20分鐘，sfiI酶50度酶切15-20分鐘。 各位高手知不知道這是怎么回事啊 急求幫助啊 這個(gè)NOTI賊貴賊貴的，用不起了�。。。。。。。。。。�！ |
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