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[求助]
人胚腎細胞293培養(yǎng)求助 已有2人參與
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各位蟲友，本人化學(xué)專業(yè)，之前沒有培養(yǎng)過動物細胞，現(xiàn)在在培養(yǎng)人胚腎細胞293上給卡死了，希望大家能幫助一下，實在不知道怎樣進行下去了。 這半個月由于論文需要，想培養(yǎng)人胚腎細胞293做金屬形態(tài)學(xué)代謝研究，培養(yǎng)之前看了很多關(guān)于這種細胞的培養(yǎng)條件和方法，在論壇里也看了很多帖子，很多人說293細胞很容易培養(yǎng)，6-8小時就貼壁，并且確實有很多文獻也指出了。但同時論壇里還有另外一半人指出了293細胞的貼壁性很差，細胞很嬌貴，所以很難養(yǎng)，現(xiàn)在我也出現(xiàn)了同樣的問題，細胞到目前4天了還是懸浮圓形的，極少數(shù)貼壁，并且細胞液久了就會也絮狀物質(zhì)產(chǎn)生，但是細胞數(shù)目一直在增加。不知道是什么原因讓它貼壁這么難 下面我把培養(yǎng)的詳細放在附件圖片中和大家講一下，希望大家能幫我出一下招，小弟很感激... 細胞在上海某生物買的，收到貨后也按步驟操作，但就是不貼壁，三天后告訴賣家還不貼壁并且是圓形，并且發(fā)了圖片給他，賣家很熱心告訴細胞已經(jīng)死了，于是就寄給我小瓶的細胞保護液，就是圖23中的狀態(tài)，這次我怕是培養(yǎng)瓶的問題，就用了不同品牌的，結(jié)果兩天后，細胞還是圓形，如下圖579，但是細胞公司堅持說他們培養(yǎng)這種細胞6小時差不多就會貼壁了，但是就是不知道到我這里就不貼了。 半個月過去了，我懷疑是細胞株的問題，決定換一家公司，于是就從我學(xué)校細胞庫拿了一株，同時，我把我的培養(yǎng)基和培養(yǎng)瓶給了細胞庫老師，他也同時分別用他的培養(yǎng)基和我的培養(yǎng)基，結(jié)果24小時候后，我在實驗室培養(yǎng)的和這位老師培養(yǎng)的都沒有貼壁，都呈圓形狀。 現(xiàn)在我兩天沒去換液了，不知道明天又會怎樣，這樣下去單純在這個細胞培養(yǎng)上就出現(xiàn)這種問題，壓力好大啊，不知道這論文要到何時去了，還望有這方面經(jīng)驗的蟲友提供幫助，謝謝大家了... 1.收到細胞時圖1.JPG 3.收到細胞時-圖3.JPG 4.收到細胞時-圖4.JPG 5.6孔板培養(yǎng)24小時-大部分懸浮.JPG 6.6孔板培養(yǎng).JPG 7.培養(yǎng)瓶1培養(yǎng)24小時-80%貼壁.JPG 8.培養(yǎng)瓶.JPG 9.康寧培養(yǎng)瓶培養(yǎng)24小時-70%貼壁.JPG 10.康寧培養(yǎng)瓶.JPG 11.培養(yǎng)皿培養(yǎng)24小時-幾乎不貼壁.JPG IMG_1220.JPG 培養(yǎng)液配制.png 全部貼壁的狀態(tài).JPG 三天前用康寧培養(yǎng)基-出現(xiàn)了梭形1.JPG 三天前用康寧培養(yǎng)基-出現(xiàn)了梭形2.JPG 實驗器材.png |
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jurkat.1640
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