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[求助]
H1299細胞中對HIF-1alpha表達用western鑒定 已有1人參與
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| 結(jié)果出現(xiàn)兩個問題：一個是沒有用化合物處理的H1299細胞的western樣品中，也有HIF-1alpha的條帶？抗體說明書上說HIF-1alpha在132kDa的地方，但我跑出來時在100-130kDa之間，兩次都是，不知道原因何在！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
waxSnail: 金幣+5, ★★★很有幫助 2014-06-22 19:01:07
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
waxSnail: 金幣+5, ★★★很有幫助 2014-06-22 19:01:07
| 在遇到這樣的問題時，樓主首先可以考慮一個正對照～譬如HIF-1a在低氧處理或DMOG，CocL2處理時會高表達～樓主可以用這些條件處理H1299細胞設(shè)置一個正對照看看HIF-1a的條帶位置作為比對～～而且不同細胞HIF-1a有不同的修飾～～它的分子質(zhì)量會在90-120KD之間（有可能也會132KD，不過我沒遇到過）～～HIF-1a在正常情況下癌細胞中也會有少量的表達～H1299中有表達很正常 |
2樓2014-06-22 18:22:59
3樓2014-06-22 19:01:01
4樓2014-06-23 13:40:35
★ ★ ★
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-06-23 18:34:01
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2014-06-23 18:34:01
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低氧/缺氧誘導(dǎo)你可以用特定配置的低氧/缺氧混合氣與你的細胞培養(yǎng)箱相連接～然后就可以進行低氧處理了～～或者你可以用一個專門誘導(dǎo)低氧的那種封閉容器～將細胞放在里面以后～用特定配置的低氧/缺氧氣體往里面充氣不停置換原先存在容器里面的氣體～最后也可以達到低氧或缺氧的效果～～現(xiàn)在關(guān)于低氧的文章NCBI里面一大堆～你搜hypoxia就可以搜出一大筐的文章～～但是我估計很難搜到具體誘導(dǎo)低氧的protocol～～你可以請教下你們學校有沒有做過這方面的實驗室～其實很簡單的～～祝樓主實驗順利～～ |
5樓2014-06-23 14:25:22
6樓2014-06-23 18:48:51
7樓2014-09-25 10:42:47
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