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[求助]
H1299細(xì)胞中對(duì)HIF-1alpha表達(dá)用western鑒定 已有1人參與
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| 結(jié)果出現(xiàn)兩個(gè)問題：一個(gè)是沒有用化合物處理的H1299細(xì)胞的western樣品中，也有HIF-1alpha的條帶？抗體說明書上說HIF-1alpha在132kDa的地方，但我跑出來時(shí)在100-130kDa之間，兩次都是，不知道原因何在！ |
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3樓2014-06-22 19:01:01
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
waxSnail: 金幣+5, ★★★很有幫助 2014-06-22 19:01:07
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
waxSnail: 金幣+5, ★★★很有幫助 2014-06-22 19:01:07
| 在遇到這樣的問題時(shí)，樓主首先可以考慮一個(gè)正對(duì)照～譬如HIF-1a在低氧處理或DMOG，CocL2處理時(shí)會(huì)高表達(dá)～樓主可以用這些條件處理H1299細(xì)胞設(shè)置一個(gè)正對(duì)照看看HIF-1a的條帶位置作為比對(duì)～～而且不同細(xì)胞HIF-1a有不同的修飾～～它的分子質(zhì)量會(huì)在90-120KD之間（有可能也會(huì)132KD，不過我沒遇到過）～～HIF-1a在正常情況下癌細(xì)胞中也會(huì)有少量的表達(dá)～H1299中有表達(dá)很正常 |
2樓2014-06-22 18:22:59
4樓2014-06-23 13:40:35
★ ★ ★
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-06-23 18:34:01
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-06-23 18:34:01
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低氧/缺氧誘導(dǎo)你可以用特定配置的低氧/缺氧混合氣與你的細(xì)胞培養(yǎng)箱相連接～然后就可以進(jìn)行低氧處理了～～或者你可以用一個(gè)專門誘導(dǎo)低氧的那種封閉容器～將細(xì)胞放在里面以后～用特定配置的低氧/缺氧氣體往里面充氣不停置換原先存在容器里面的氣體～最后也可以達(dá)到低氧或缺氧的效果～～現(xiàn)在關(guān)于低氧的文章NCBI里面一大堆～你搜hypoxia就可以搜出一大筐的文章～～但是我估計(jì)很難搜到具體誘導(dǎo)低氧的protocol～～你可以請(qǐng)教下你們學(xué)校有沒有做過這方面的實(shí)驗(yàn)室～其實(shí)很簡(jiǎn)單的～～祝樓主實(shí)驗(yàn)順利～～ |
5樓2014-06-23 14:25:22
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