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三爺111金蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于BMDM-骨髓來源的巨噬細胞的培養(yǎng)。 已有2人參與
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最近在用骨髓細胞誘導巨噬細胞，沖出骨髓-過篩網(wǎng)-裂紅之后將細胞放在大培養(yǎng)皿里讓其貼壁2h后，取上清放到新的培養(yǎng)皿里加1640完全培養(yǎng)基和50ng/ml的M-CSF培養(yǎng)6天，中間半量換液兩次。但養(yǎng)出來的細胞在20倍鏡下觀察胞內(nèi)有空泡，不知道是怎么會事，是細胞本身就是這樣還是細胞因子的用量太大呢？求高人指教啊！ R3CKDF[`}]OK{Z{@QG3[0T2.jpg |
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 巨噬細胞實驗 |
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我一直在養(yǎng)BMDM 圖中的細胞一看就是培養(yǎng)的時間太久了，cell confluence 太低，這樣已經(jīng)不好用了。 我們用100ng/mL M-CSF 在 RPMI-1640（5% Pen/Step, 10% FBS)里培養(yǎng)。 第一天算Day0，Day3天添加培養(yǎng)基100ng/mL M-CSF（不換RPMI） 第五天confluence在80%-90% 就可以使用了。 跑過FACS 這時候97%的貼壁細胞都是F4/80+CD11b+ 第三天的時候是80%左右。 到第七天有99%以上的細胞都是F4/80+CD11b+,但是這時候細胞數(shù)量已經(jīng)下降的很厲害了。 |
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三爺11116樓2016-03-22 01:28:42
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★
三爺111: 金幣+4, ★★★很有幫助 2014-09-16 09:41:50
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我們實驗室誘導BMDM是這樣誘導的： 1、引頸處死小鼠，將小鼠后肢的皮毛剝置足部，連同褪下的皮毛剪去足部，剪下后腿，放入盛有無菌PBS的培養(yǎng)皿中 2、鑷子夾住腿骨一端后，用剪刀剔除肌肉，在關(guān)節(jié)處剪斷腿骨 3、 用2mL注射器吸取無血清的1640培養(yǎng)基，將針頭刺入骨髓腔，反復沖洗骨髓至骨髓變白，將骨髓沖洗液加入到50mL離心管中，1000rpm離心5min 4、將離心得到的骨髓細胞用10mL含MCSF（50ng/mL）和血清的1640培養(yǎng)基重懸，然后分裝到兩個25cm2的細胞培養(yǎng)瓶中，置于37℃和5%CO2氣體濃度適度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天 5、棄上清，換5mL含MCSF（50ng/mL）和血清的1640培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)4天 |
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6樓2014-09-15 16:40:01
8樓2014-09-22 12:37:30
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17樓2016-03-22 15:12:27
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2樓2014-07-01 13:21:01
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3樓2014-07-01 15:12:46
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4樓2014-07-01 16:19:04
pudding9696
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youlinglyw: 應助指數(shù)-1, 屏蔽內(nèi)容, 違規(guī)存檔, 廣告 2014-07-04 15:21:31
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5樓2014-07-04 14:29:39
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7樓2014-09-16 09:41:39
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10樓2015-02-03 11:23:27
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