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luckydog52木蟲 (著名寫手)
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[求助]
染色質(zhì)免疫共沉淀 中的 INPUT 和IP代表什么？ 已有5人參與
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看文獻(xiàn)遇到染色質(zhì)免疫共沉淀的圖，其中的INPUT 和IP是什么意思�。� 希望誰能簡單的解釋一下，謝謝 |
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laopenti
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2樓2014-07-03 12:31:47
3樓2014-07-04 08:13:02
【答案】應(yīng)助回帖
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gyesang: 金幣+5, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-07-16 15:28:11
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ChIP---染色質(zhì)免疫沉淀（chromatin immunoprecipitation assay）是目前唯一研究體內(nèi)DNA與蛋白質(zhì)相互作用的方法。 IP--免疫沉淀（immunoprecipitation），在CHIP試驗(yàn)中主要有兩點(diǎn)意思：1）抗原蛋白質(zhì)（靶蛋白，即所研究的目的基因編碼的蛋白質(zhì)，一般是帶有標(biāo)簽如GFP，MYC的融合蛋白）和抗體的特異性結(jié)合；2）細(xì)菌蛋白質(zhì)的“prorein A”特異性地結(jié)合到免疫球蛋白，即抗體的FC片段�，F(xiàn)在多用精制的prorein A預(yù)先結(jié)合固化在argarose的beads。 結(jié)合ChiP的具體操作步驟，甲醛處理細(xì)胞→收集細(xì)胞，超聲破碎，即得到核蛋白和DNA。從這里開始分兩部分，A部分不錯(cuò)任何處理，作為Input；B部分加相應(yīng)的抗體（根據(jù)你轉(zhuǎn)基因的標(biāo)簽或者自己合成的靶蛋白的抗體），作為IP。加抗體，與靶蛋白-DNA復(fù)合物相互結(jié)合→加入ProteinA，結(jié)合抗體-靶蛋白-DNA復(fù)合物，并沉淀→解交聯(lián)，ProteinK消化蛋白，并提取DNA。同時(shí)也將Input的DNA提取出來。 IP下的DNA想對(duì)于INput的DNA肯定是很少的，IP/Input的比值就反應(yīng)出目的蛋白結(jié)合ＤＮＡ的量，這兩個(gè)的ＤＮＡ含量是通過Ｒｅａｌ�。裕椋恚濉。校茫抑械模茫灾祦沓尸F(xiàn)。 |
4樓2014-07-09 15:48:44
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