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luckydog52木蟲 (著名寫手)
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[求助]
染色質免疫共沉淀 中的 INPUT 和IP代表什么？ 已有5人參與
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看文獻遇到染色質免疫共沉淀的圖，其中的INPUT 和IP是什么意思��？ 希望誰能簡單的解釋一下，謝謝 |
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7樓2022-03-30 20:58:22
jurkat.1640
至尊木蟲 (文壇精英)
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2樓2014-07-03 12:31:47
3樓2014-07-04 08:13:02
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金幣+5, 鼓勵回帖交流！ 2014-07-16 15:28:11
gyesang: 金幣+5, 鼓勵回帖交流！ 2014-07-16 15:28:11
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ChIP---染色質免疫沉淀（chromatin immunoprecipitation assay）是目前唯一研究體內DNA與蛋白質相互作用的方法。 IP--免疫沉淀（immunoprecipitation），在CHIP試驗中主要有兩點意思：1）抗原蛋白質（靶蛋白，即所研究的目的基因編碼的蛋白質，一般是帶有標簽如GFP，MYC的融合蛋白）和抗體的特異性結合；2）細菌蛋白質的“prorein A”特異性地結合到免疫球蛋白，即抗體的FC片段�，F在多用精制的prorein A預先結合固化在argarose的beads。 結合ChiP的具體操作步驟，甲醛處理細胞→收集細胞，超聲破碎，即得到核蛋白和DNA。從這里開始分兩部分，A部分不錯任何處理，作為Input；B部分加相應的抗體（根據你轉基因的標簽或者自己合成的靶蛋白的抗體），作為IP。加抗體，與靶蛋白-DNA復合物相互結合→加入ProteinA，結合抗體-靶蛋白-DNA復合物，并沉淀→解交聯，ProteinK消化蛋白，并提取DNA。同時也將Input的DNA提取出來。 IP下的DNA想對于INput的DNA肯定是很少的，IP/Input的比值就反應出目的蛋白結合ＤＮＡ的量，這兩個的ＤＮＡ含量是通過Ｒｅａｌ�。裕椋恚濉。校茫抑械模茫灾祦沓尸F。 |
4樓2014-07-09 15:48:44
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