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[求助]
目的片段回收后濃度較低，如何濃縮？ 已有6人參與
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| 我回收了我的目的片段，條帶很暗且稍偏高，濃度有些低，連接表達載體一直連接不上，希望可以把我的目的片段濃縮一下。不知道該如何濃縮，希望知道的大俠們指點一下 謝謝 |
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luwei13566
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gyesang: 金幣+3, 鼓勵回帖交流！ 2014-07-21 11:02:36
gyesang: 金幣+3, 鼓勵回帖交流！ 2014-07-21 11:02:36
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你連上T載體測序除了一個點突變其他的位置正確對吧，你現(xiàn)在的問題是1.你切膠回收后比較暗，2.條帶偏大，3.以膠回收產(chǎn)物二次PCR無條帶。 針對第一點，首先你要考慮你酶切完全不完全~或者你的酶切位點甲基化導致切割困難，酶切時間短自然你基因條帶弱 針對第二點，T載體上也是有不少酶切位點的，如果你的酶切時間不夠或酶切位點甲基化，切割出現(xiàn)在載體的酶切位點上自然你要回收的序列會偏大。 針對第三點，你割膠回收后測過濃度嗎？你的條帶本身就很弱我估計你回收完都沒東西了。 所以最好的解決辦法就是延長切割時間，其次篩查你加的酶切位點是否有甲基化酶識別區(qū)導致甲基化。你有你酶切質粒的電泳圖嗎？能不能發(fā)出來看看你的圖 |
28樓2014-07-21 10:57:50
for5
木蟲 (正式寫手)
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2樓2014-07-07 16:19:56
隨風飄搖11
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3樓2014-07-07 23:12:13
4樓2014-07-08 00:00:30
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