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張冰寶新蟲 (小有名氣)
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[求助]
目的片段回收后濃度較低,如何濃縮? 已有6人參與
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| 我回收了我的目的片段,條帶很暗且稍偏高,濃度有些低,連接表達(dá)載體一直連接不上,希望可以把我的目的片段濃縮一下。不知道該如何濃縮,希望知道的大俠們指點(diǎn)一下 謝謝 |
木蟲 (正式寫手)
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看來就是你割膠回收的問題了。優(yōu)化下酶連體系吧 1.你的表達(dá)載體多大?也是割膠回收的吧,估計(jì)濃度也不高。以后載體雙酶切后可以直接用PCR產(chǎn)物純化試劑盒純化,不割膠估計(jì)損失會(huì)小些,純化后也測個(gè)濃度。你這次又涂了幾個(gè)平板還是有轉(zhuǎn)化子長出來但都是假陽性嗎,本來你割膠回收后量就少如果還有假陽性那你載體的雙酶切時(shí)間還得延長。你想想本來就少,如果還有沒切開的那自然更連不上了,載體的濃度是你后期轉(zhuǎn)化子多少的關(guān)鍵。 2.既然你是從T載體上切基因,那肯定是雙酶切的產(chǎn)物而且必須割膠,那你以后基因再多加點(diǎn),你現(xiàn)在連接體系是怎么分配的?基因多少,載體多少,體系多大?你基因濃度實(shí)在上不去的話那以后酶連體系不要加水全加基因。 |

木蟲 (正式寫手)

木蟲 (著名寫手)

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