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晨靄微涼金蟲 (小有名氣)
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[求助]
連續(xù)復(fù)蘇了幾種細胞都死亡了，大家?guī)兔Ψ治鱿略虬桑x謝 已有6人參與
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| 不知道什么原因，最近實驗室養(yǎng)的細胞狀態(tài)都不是很好，其他師姐的細胞狀態(tài)也不好。然后我已經(jīng)把細胞房、孵箱打掃消毒，培養(yǎng)基也重配了，最近復(fù)蘇的細胞（一年前凍存的）還是死了，沒有明顯的染菌現(xiàn)象。不知道什么原因，請問大家有沒遇到這種狀況，怎么解決?謝謝！ |
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 細胞生物學(xué)實驗經(jīng)驗 |
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具體原因還真不好說。按理來說，細胞全部死亡很少見。我解凍3年前的細胞都沒什么問題。有可能你之前冷凍的方法有失誤導(dǎo)致細胞冷凍的時候就死了。你回憶一下，同一批次冷凍的細胞，以前解凍的時候是否發(fā)生死亡現(xiàn)象，如果以前沒有發(fā)生，那就排除冷凍時照成細胞的死亡。如果實驗室不干凈的話，可能照成細胞污染，但你說沒有污染跡象，說明細胞還是在解凍及培養(yǎng)方面有問題，一般解凍沒什么大問題。好好檢查培養(yǎng)液，是不是個別藥品過期了，或是血清更換了，還是其他原因。 有時候?qū)嶒灳瓦@樣，一段時間不明原因的不好，過了這段時間又好了起來。很奇怪的。 |
2樓2014-07-11 15:40:02
j1234555jhh
銅蟲 (初入文壇)
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血清、培養(yǎng)基是否和原來的同廠家或同批次？純水機有沒出問題？培養(yǎng)基的pH是否合適？有沒在孵箱內(nèi)加水盤？孵箱的溫度、濕度、二氧化碳濃度調(diào)節(jié)功能是否正常？細胞房旁邊有沒有進行涉及揮發(fā)性很大的有毒化學(xué)試劑的實驗？ 建議：首先檢查培養(yǎng)基、血清是否過期，然后檢查去離子水的電阻等值（純水機上有顯示），再檢查孵箱功能調(diào)節(jié)是否正常，然后找同學(xué)借一瓶傳代后尚未長滿的細胞，用你新配的培養(yǎng)基養(yǎng)1~2天看下細胞有沒異常，若異常，很可能是你的培養(yǎng)基或血清有問題（原料、水、pH都有可能），依次排查；若細胞無異常，建議將此種細胞按你以前的步驟凍存，隔天后即可按你的原來的步驟進行復(fù)蘇，看細胞有無問題；若有問題，換DMSO或者反思自己的凍存、復(fù)蘇步驟是否有問題；若無問題，找個人幫你復(fù)蘇你以前的細胞；逐步排查肯定能找到問題癥結(jié)。 |
5樓2014-07-12 01:37:16
6樓2014-07-12 16:31:10
Crocodile-YK
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7樓2014-07-14 09:00:49
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8樓2014-07-14 09:31:46
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9樓2014-07-15 11:15:47
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